측정 Caenorhabditis 엘레간스 수명

요약

이 문서에서 우리는 UV - 살해 박테리아 음식 고체 미디어에 유지 nematodes의 수명을 측정하는 일반적인 프로토콜을 제시한다.

초록

노화는 세포의 구성 요소와 사망률의 결과 organelles의 점진적 저하 특징 퇴행성 과정이다. 선충류

프로토콜

1 부 : 준비 선충류의 성장 미디어 (NGM) 접시

이 섹션은 수명 실험에 사용하기 위해 고체 NGM 플레이트의 준비에 대해 설명합니다. 암피실린 (앰프)와 NGM에 추가 fluorodeoxyuridine (FUDR)를 모두 가지고 아무런 첨가제 및 앰프 / FUDR 접시를 포함하지 표준 NGM 번호판, : 기본 수명 실험은 접시 두 가지 유형이 필요합니다. 암피실린 외국 세균 오염을 방지하는 데 사용됩니다. FUDR은 세포 분열을 억제 계란 생산을 감소하고, 부화에서 계란을 방지할 수 있습니다. 장수 분석을위한 FUDR의 사용은 성인 수명에 영향을 성장 유충에서 분리하기 위해 모든 며칠 벌레를 전송하는 필요를 제거하지 않습니다. 접시의 두 종류 E. 함께 씨앗 아르 이후 UV에 노출에 의해 살해 대장균 박테리아 OP50.

1. NGM (조리법 및 스토리지 노트 섹션 5 참조)와 레이블 배양 접시를 준비합니다. 당신은 NGM 10 ML 당 1 60mm 페트리 접시가 필요합니다. 당신이 이전에 준비 고체 NGM 시작하는 경우, 1.2 단계로 진행합니다. 당신은 갓 autoclaved NGM 시작하는 경우, 1.4 단계로 건너 뜁니다.
2. 완전히 30초 펄스의 높이 microwav....

토론

장수 유전자 제어 C. 광범위하게 연구되어 수명을 확인할 수있는 쉽고 인텔리로 주로 인해 엘레간스. 본 문서에서 언급한 다른 프로토콜은 C로 재현성 수명 데이터를 얻기위한 기본 프레임 워크를 설명 엘레간스하며 relatednematode 수종에도 적용할 수 있습니다. ² 이러한 절차는 다양한 조건 하에서 수명을 측정하기 위해 적응 수있는 몇 가지 간단한 변경을함으로써. 여기 우리는 RNA 간섭 (RNAi), 세균의 박탈에 의해식이 제한, 그리고 약물없는 NGM, 라이브 박테리아를 포함한 몇 가지 일반적인 변형을 설명합니다.

아마이 프로토콜의 가장 일반적인 변형 라이브 박테리아에 벌레의 유지이다. 이것은 몇 가지 사소한 변경하여 수행할 수 있습니다. 첫째, 세균 (1.13 단계 1.7)와 접시 시딩위한 절차를 변경합니다. 대신 포화에 OP50 문화를 성장, 200 μL의 액체 문화에서 직접 접시.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Agar	시약	Fisher Scientific	DF0145-17-0 (214530)
Ampicillin	시약	MidSci	0339
BactoTryptone	시약	Fisher Scientific	DF0123-17-3 (211705)
BactoPeptone	시약	Fisher Scientific	DF0118-17-0 (211677)
CaCl2	시약	Fisher Scientific	NC9699248 (1332-01)
Carbenicillin	시약	Gold Biotechnology	C0109
Cholesterol	시약	Sigma-Aldrich	C75209
Fluorodeoxyuridine (FUDR)	시약	Sigma-Aldrich	F0503
Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG)	시약	Gold Biotechnology	I2481C5
KPi Dibasic	시약	Fisher Scientific	5087862 (3252-01)
KPi Monobasic	시약	Fisher Scientific	5087861 (3246-01)
MgSO4	시약	Fisher Scientific	NC9561800 (2500-01)
NaCl	시약	Fisher Scientific	S251
Tris	시약	Sigma-Aldrich	T1503
Yeast Extract	시약	Fisher Scientific	DF0886-17-0 (288620)