तटीय समुद्र के पानी के नमूनों की छोटी मात्रा (1-3L) निस्पंदन
Summary
यह वीडियो दस्तावेजों छोटे मात्रा (~ 1 एल) पानी के स्तंभ से माइक्रोबियल बायोमास निस्पंदन.
Abstract
वर्कफ़्लो बहाव माइक्रोबियल समुदाय के लिए तटीय समुद्री जल, पोषक तत्व और ट्रेस गैस विश्लेषण के संग्रह के साथ शुरू होता है. आज प्रदर्शन के नमूने के लिए Saanich Inlet में एचएमएस जॉन Strickland के संचालन के डेक से एकत्र किए गए थे. यह वीडियो दस्तावेजों छोटे मात्रा (~ 1 एल) पानी के स्तंभ से माइक्रोबियल बायोमास निस्पंदन. यहाँ, वहाँ कोई पूर्व निस्पंदन कदम है, तो बायोमास के सभी आकार वर्गों 0.22 कट ऑफ फिल्टर सुक्ष्ममापी नीचे एकत्र कर रहे हैं: प्रोटोकॉल बड़ी मात्रा में नमूने प्रोटोकॉल पहले वर्णित है, एक प्रमुख अंतर के साथ एक विस्तार है. नमूने इस तरह एकत्र न्यूक्लिक एसिड के विश्लेषण के लिए आदर्श होते हैं. सेट अप, निस्पंदन, और स्वच्छ कदम प्रत्येक 20-30 मिनट के बारे में ले. एक साथ दो क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप का उपयोग अगर, 8 नमूने एक ही समय में फ़िल्टर्ड किया जा सकता है. नमूने यात्राओं के बीच biofilm गठन को रोकने के सभी निस्पंदन उपकरण पतला एचसीएल और विआयनीकृत जल के साथ rinsed होना चाहिए और उपयोग के बाद तुरंत autoclaved.
Protocol
Discussion
यह उपयोग करने के लिए नमक पानी के किसी भी सुस्त निशान है कि अन्यथा उपकरण खुरचना होगा निकालने के बाद एक नम तौलिया के साथ सत्ता पक्ष और पंप करने के लिए नीचे पोंछ जरूरी है. हालांकि प्रक्रिया सरल है, समय की आवश…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम तटीय और खुले समुद्र के पानी के कम ऑक्सीजन क्षेत्रों पर चल रहे अध्ययन का समर्थन करने के लिए अभिनव, ब्रिटिश कोलंबिया नॉलेज डेवलपमेंट फंड और राष्ट्रीय विज्ञान और कनाडा के इंजीनियरिंग रिसर्च काउंसिल () NSERC के लिए कनाडा फाउंडेशन धन्यवाद देना चाहूंगा. काला कौवा NSERC, किल्लम और तुला माइक्रोबियल विविधता और विकास के लिए वित्त पोषित केंद्र नींव से फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Peristaltic pump | Masterflex (Cole Palmer) | 77913-20, 77200-62, 77200-04 | ||
| Tygon LFL tubing | Masterflex (Cole Palmer) | 06429-24 | For filtration apparatus | |
| Hose clamps | Cole Palmer | 0683204 | For filtration apparatus | |
| 1/4” x 3/16” pipe adaptors | Cole Palmer | 31702-20 | For filtration apparatus | |
| Polypropylene prefilter housing | ADVANTEC | 501200 | For filtration apparatus | |
| Metal luer fitting (Hose end to Male luer lock) | Cole Palmer | 31507-27 | For filtration apparatus | |
| 2“ Magnets | For filtration apparatus | |||
| 3 port carboy caps | For filtration apparatus | |||
| GV 0.22 μm STERIVIX filters | Millipore | SVGV01R5 | ||
| 47 mm diameter 2.7 μm GF/D filters | Whatman | 1823047 | ||
| Lysis buffer | 0.75 M sucrose, 40 mM EDTA, 50 mM Tris (pH 8.3) | |||
| 0.1 % HCl | For post-filtration rinse | |||
| Autoclaved water | For post-filtration rinse |
