تشريح والتسجيل من مفرق العضلية جيم ايليجانس
Summary
تطبيق الكهربية لنقاط الاشتباك العصبي للوصول يوفر قدرا من النشاط متشابك قابلة للقياس الكمي ، ومفيدة في تحليل المسوخ متشابك. توضح هذه المقالة أسلوب تشريح المستخدمة للكشف عن الوصلات العصبية والعضلية (NMJ) من<em> ايليجانس انواع معينة (جيم ايليجانس)</em> ويناقش بإيجاز بعض الاستخدامات التي يمكن تطبيق هذا الإعداد.
Abstract
العصبي هو العملية التي من خلالها نقل المعلومات عن طريق الخلايا العصبية إشارات كيميائية إلى أهداف بعد متشابك بهم ، على المقياس الزمني السريع. هذه عملية معقدة تتطلب الكثير من النشاط المنسق البروتينات قبل وبعد متشابك لضمان اتصال متشابك المناسبة ، توصيل الإشارات الكهربائية ، واستهداف وفتيلة من حويصلات إفرازية ، والاستشعار من الكالسيوم ، والانصهار الحويصلة التوطين ، ووظيفة المستقبلات بعد المشبكي وإعادة التدوير وأخيرا ، الآليات. علماء الأعصاب كما ان هدفنا هو توضيح البروتينات التي تعمل في كل من هذه الخطوات وفهم آليات عملها. التسجيلات الكهربية من نقاط الاشتباك العصبي توفير الكمي تلا الأحداث الكامنة الكهربائية التي تحدث أثناء انتقال متشابك. من خلال الجمع بين هذه التقنية مع مجموعة قوية من الأدوات الجزيئية والجينية المتاحة لمعالجة البروتينات متشابك في C. ايليجانس ، يمكننا تحليل التغييرات الناتجة الفنية في نقل متشابك.
وجيم ايليجانس NMJs تشكلت بين الخلايا العصبية الحركية وتحرك عضلات الجسم السيطرة الجدار ، وبالتالي ، المسوخ مع الظواهر غير منسقة locomotory المعروفة باسم (UNC) مفتاحية انتقال كثير من الأحيان متشابك التشويش في هذه المشابك 1. منذ تمسك المسوخ UNC على إمدادات غنية من مصدر الغذاء البكتيري ، إلا أنها تظل قابلة للحياة ، طالما أنها لا تزال تحتفظ ببعض القدرة على ضخ البلعوم لاستيعاب المواد الغذائية. هذا ، جنبا إلى جنب مع حقيقة أن جيم كما توجد ايليجانس المخنثين ، ويسمح لهم بالمرور على ذرية طافرة من دون الحاجة إلى التزاوج السلوكيات بمزيد من التفاصيل. هذه الصفات ، إلى جانب قدرتنا الأخيرة إلى سجل من الديدان NMJs 2،3،7 جعل هذا الكائن الحي الذي نموذجا ممتازا للتصدي على وجه التحديد كيف UNC العصبي أثر المسوخ.
الأسلوب ينطوي على تشريح الديدان البالغة شل حركة باستخدام الغراء cyanoacrylic من أجل إجراء شق في جليدة الدودة تعريض NMJs. منذ C. ايليجانس الكبار فقط 1 ملم في الطول يتم إجراء تشريح مع استخدام مجهر تشريح ممتازة ، ويتطلب التنسيق بين اليد والعين. والتسجيلات التي NMJ كامل الخلية يمكن لقط أثار الجهد الفردي خلايا عضلات الجسم الجدار والافراج عن العصبي باستخدام مجموعة متنوعة من البروتوكولات بما في ذلك تحفيز التحفيز الكهربائي ، وعلى ضوء تنشيط قناة رودوبسين بوساطة الاستقطاب 4 و ملحي مفرط التناضح ، والتي سيتم ووصف فترة وجيزة.
Protocol
Discussion
وهو مثالي للكائن النموذج الجيني C ، ايليجانس لدراسة انتقال متشابك ، من خلال التحليل الوظيفي من الطفرات في الجينات ترميز البروتينات متشابك. هنا قد وصفنا تقنية التشريح أن يجعل C. ايليجانس NMJs الوصول لتحليل الكهربية. يصور شريط الفيديو المرافق الخطوات الحاسمة في…
Acknowledgements
وقد تم تمويل هذه المقالة عن طريق منح المعاهد الوطنية للصحة لJER. وأود أن أشكر الدكتور أليكس جوتشالك لتوفير الديدان المعدلة وراثيا في التعبير عن قناة رودوبسين الخلايا العصبية الحركية كوليني المستخدمة في واحدة من المظاهرات التسجيل.
References
- Brenner, S. . 유전학. 77 (1), 71-71 (1974).
- Richmond, J. E., Davis, W. S., Jorgensen, E. M. . Nat Neurosci. 2 (11), 959-959 (1999).
- Richmond, J. E. . WormBook. 1, (2006).
- Liewald, J. F., Brauner, M., Stephens, G. J. . Nature methods. 5 (10), 895-895 (2008).
- Lockery, S. R., Goodman, M. B. . Methods in enzymology. 293, 201-201 (1998).
- Brockie, P. J., Mellem, J. E., Hills, T. . Neuron. 31 (4), 617-617 (2001).
- Richmond, J. E., Jorgensen, E. M. . Nat Neurosci. 2 (9), 791-791 (1999).
