버딩 효모에 Replicative 수명 측정
Summary
이 문서에서 우리는 효모 어머니 세포의 replicative의 수명을 측정하는 일반적인 프로토콜을 제시한다.
Abstract
노화는 세포의 구성 요소와 사망률의 결과 organelles의 점진적 저하 특징 퇴행성 과정이다. 신진 효모<em> Saccharomyces cerevisiae</em> 노화의 생물학을 연구하기 위해 널리 사용되고 있으며, 효모 장수의 여러 determinants는 벌레를 포함한 다세포 eukaryotes에 보존하는 표시, 파리, 생쥐되었습니다<sup> 1</sup>. 효모에서 노화 쉽게 계량 연령 관련 phenotypes의 부족으로 인해 일반적인 사용에서 두 개의 서로 다른 수명의 패러다임과 다른 상황에서 세포의 수명을 측정하여 거의 독점적으로 assayed되었습니다<sup> 2</sup>. 연대순 수명은 어머니 세포가 아닌 나누어, 정지 같은 상태에서 살아남을 수있는 시간의 길이를 말합니다, 그리고 다세포 eukaryotes의 포스트 mitotic 세포의 노화에 대한 모델 역할을 제안합니다. Replicative 수명은 반대로, 노화하기 전에 엄마가 세포에 의해 만들어진 딸 세포의 수를 의미하고, mitotically 활성 세포의 노화의 모델을 제공하는 것으로 생각됩니다. 여기 신진 효모 어머니 세포의 replicative의 수명을 측정하는 일반적인 프로토콜을 제시한다. replicative 수명 분석의 목적은 몇 번이나 각각의 어머니 세포 꽃봉오리를 결정하는 것입니다. 엄마와 딸 세포는 쉽게에는 자이스 혈구 Axioscope 40 또는 다른 유사한 모델로 표준 가벼운 현미경 (총 배율 160X)를 사용하여 숙련된 연구원으로 구분하실 수 있습니다. 어머니 세포의 딸 세포의 물리적 분리는 광섬유 바늘이 장착된 수동 micromanipulator를 사용하여 이루어진다. 일반 실험실 효모 종자는 어머니 당 20-30 딸 세포를 생산 하나의 수명 실험은 2~3주 필요합니다.
Protocol
Acknowledgements
이 작품은 엘리슨 의료 재단에서 MK와 BKK에 부여에 의해 지원되었다. MK는 노화에 엘리슨 의료 재단 신규 장학생입니다. 우리는 촬영하는 동안 도움을 Soumya Kotireddy 감사하고 싶습니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Bacto-Peptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) | |
| Glucose |
References
- Kaeberlein, M., Burtner, C. R., Kennedy, B. K. Recent developments in yeast aging. PLoS Genet. 3, (2007).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109-120 (2006).
- Smith, E. D. Quantitative evidence for conserved longevity pathways between divergent eukaryotic species. Genome Res. 18, 564-570 (2008).
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29-54 (2008).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63, 113-121 (2008).
- Jiang, J. C., Jaruga, E., Repnevskaya, M. V., Jazwinski, S. M. An intervention resembling caloric restriction prolongs life span and retards aging in yeast. Faseb J. 14, 2135-2137 (2000).
- Kaeberlein, M., Kirkland, K. T., Fields, S., Kennedy, B. K. Sir2-independent life span extension by calorie restriction in yeast. PLoS Biol. 2, E296-E296 (2004).
- Lin, S. J., Defossez, P. A., Guarente, L. Requirement of NAD and SIR2 for life-span extension by calorie restriction in Saccharomyces cerevisiae. Science. 289, 2126-2128 (2000).
- Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Large-scale identification in yeast of conserved ageing genes. Mech Ageing Dev. 126, 17-21 (2005).
- Kaeberlein, M. Regulation of yeast replicative life span by TOR and Sch9 in response to nutrients. Science. 310, 1193-1196 (2005).
