Durata pannello misura replicazione in lievito

Summary

In questo articolo vi presentiamo un protocollo generale per misurare la durata della vita di replicazione delle cellule di lievito madre.

Abstract

L'invecchiamento è un processo degenerativo caratterizzato da un progressivo deterioramento delle componenti cellulari e gli organelli con conseguente mortalità. Il lievito in erba<em> Saccharomyces cerevisiae</em> È stato ampiamente utilizzato per studiare la biologia dell'invecchiamento, e alcuni fattori determinanti di longevità lievito hanno dimostrato di essere conservato negli eucarioti pluricellulari, tra cui vermi, mosche e topi¹. A causa della mancanza di facilmente quantificabile associate all'età fenotipi, l'invecchiamento nel lievito sono stati analizzati quasi esclusivamente misurando la durata della vita delle cellule in contesti diversi, con due diversi paradigmi durata nell'uso comune². Durata cronologica si riferisce alla lunghezza del tempo che una cellula madre può sopravvivere in un non-divisione, quiescenza stato simile, e si propone di servire da modello per l'invecchiamento della post-mitotico in cellule di eucarioti pluricellulari. Durata della vita replicativa, al contrario, si riferisce al numero di cellule figlie prodotte da una cellula madre prima della senescenza, ed è pensato per fornire un modello di invecchiamento nelle cellule mitoticamente attivo. Qui vi presentiamo un protocollo generalizzato per misurare la durata della vita di replicazione di cellule di lievito madre in erba. L'obiettivo del test replicativa durata della vita è quello di determinare quante volte ogni cellula madre germogli. Le cellule madre e figlia possono essere facilmente distinguibili da un ricercatore esperto utilizzando un microscopio a luce standard (totale ingrandimento 160X), come il Axioscope Zeiss 40 o un altro modello comparabile. Separazione fisica delle cellule figlie dalle cellule madre è ottenuta utilizzando un micromanipolatore manuale dotato di una fibra ottica ago. Ceppi di lievito tipici di laboratorio 20-30 produrre cellule figlie per madre e una sperimentazione durata richiede 2-3 settimane.

Protocol

Parte 1: Preparare i ceppi e le piastre per l'analisi del ciclo di vita replicativa Questa sezione descrive la preparazione delle lastre solide YEPD per l'uso nella sperimentazione durata replicativa vita e la preparazione di cellule di lievito per l'analisi durata della vita. Utilizzando opportuni tecnica sterile, preparare piastre di agar YEPD (1 estratto di lievito%, 2% bacto-peptone, 2% agar, 2% di glucosio) che verrà utilizzato per la coltura e le cellule di lievito per l'analisi…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Agar	Reagent	Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)	DF0145-17-0 (214530)
Bacto-Peptone	Reagent	Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)	DF0118-17-0 (211677)
Yeast Extract	Reagent	Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)	DF0886-17-0 (288620)
Glucose