Mesure Life Span réplicative dans la levure bourgeonnante
Summary
Dans cet article nous présentons un protocole général pour la mesure de la durée de vie réplicative des cellules mères de la levure.
Abstract
Le vieillissement est un processus dégénératif caractérisé par une détérioration progressive des composants cellulaires et des organites résultant de la mortalité. La levure bourgeonnante<em> Saccharomyces cerevisiae</em> A été largement utilisée pour étudier la biologie du vieillissement, et plusieurs déterminants de la longévité de la levure a été démontré pour être conservée chez les eucaryotes multicellulaires, y compris les vers, des mouches et des souris<sup> 1</sup>. En raison de l'absence de facilement quantifiables liés à l'âge phénotypes, le vieillissement chez la levure a été testé presque exclusivement par la mesure de la durée de vie des cellules dans des contextes différents, avec deux différents paradigmes durée de vie dans l'usage commun<sup> 2</sup>. Durée de vie chronologique se réfère à la durée pendant laquelle une cellule mère peut survivre dans un non-séparation, la quiescence-état, et est proposé pour servir de modèle pour le vieillissement des cellules post-mitotiques chez les eucaryotes multicellulaires. Durée de vie réplicative, en revanche, renvoie le nombre de cellules filles produites par une cellule mère avant la sénescence, et est pensé pour offrir un modèle de vieillissement des cellules mitotiquement actives. Nous présentons ici un protocole généralisé pour mesurer la durée de vie réplicative des cellules mères en herbe de la levure. L'objectif de l'essai durée de vie réplicative est de déterminer combien de fois chaque bourgeons cellule mère. Les cellules mère et fille peuvent être facilement différenciés par un chercheur expérimenté à l'aide d'un microscope optique standard (grossissement total 160x), tels que le Axioscope Zeiss 40 ou un autre modèle comparable. La séparation physique des cellules filles à partir de cellules mères est réalisé en utilisant un micromanipulateur manuelle équipée d'une aiguille de fibre optique. Typiques des souches de levures en laboratoire de produire des cellules filles de 20 à 30 par la mère et une expérience durée de vie nécessite 2-3 semaines.
Protocol
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par une subvention pour MK et BKK de la Fondation Médicale Ellison. MK est une Ellison Medical Foundation New Scholar liés au vieillissement. Nous tenons à remercier pour l'aide Soumya Kotireddy pendant le tournage.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Bacto-Peptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) | |
| Glucose |
References
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