Medición de Span replicativa vida en la levadura en ciernes

Summary

En este artículo presentamos un protocolo general para la medición de la duración de la vida replicativa de las células madre de la levadura.

Abstract

El envejecimiento es un proceso degenerativo caracterizado por un deterioro progresivo de los componentes celulares y orgánulos que resulta en la mortalidad. La levadura en ciernes<em> Saccharomyces cerevisiae</em> Se ha utilizado ampliamente para estudiar la biología del envejecimiento, y hay varios factores determinantes de la longevidad de la levadura se ha demostrado que se conserva en eucariotas multicelulares, incluyendo gusanos, moscas y ratones¹. Debido a la falta de cuantificar fácilmente fenotipos asociados con la edad, el envejecimiento en la levadura se ha ensayado casi exclusivamente por la medición de la vida de las células en diferentes contextos, con dos diferentes paradigmas vida útil de uso común². Tiempo de vida cronológico se refiere a la cantidad de tiempo que una célula madre puede sobrevivir en una que no se dividen, la quietud, como estado, y se propone servir de modelo para el envejecimiento de las células post-mitóticas en las células eucariotas multicelulares. Lapso de la vida replicativa, por el contrario, se refiere al número de células hijas producidas por una célula madre antes de la senescencia, y se cree que ofrecen un modelo de envejecimiento de las células activas mitóticamente. Aquí se presenta un protocolo generalizado para medir la duración de la vida replicativa de las células de levadura en ciernes madre. El objetivo del ensayo de replicación vida es determinar cuántas veces los brotes de células madre. Las células madre y la hija se pueden distinguir fácilmente por un investigador experimentado con un microscopio óptico estándar (un aumento total de 160X), como el Zeiss Axioscope 40 u otro modelo similar. La separación física de las células hijas a partir de células madre se realiza mediante un micromanipulador manuales equipado con una aguja de fibra óptica. Típico de las cepas de levadura de laboratorio produce 20 a 30 células hijas por madre y un experimento de vida requiere de 2-3 semanas.

Protocol

Parte 1: Preparar las cepas y las placas para el análisis de la vida replicativa lapso En esta sección se describe la preparación de las placas de YEPD sólida para su uso en el experimento de replicación vida y la preparación de las células de levadura para el análisis de vida útil. Utilizando una técnica estéril su caso, preparar las placas de agar YEPD (1% extracto de levadura, 2% Bacto-peptona, 2% de agar, 2% de glucosa) que será utilizado para el cultivo de células de levadura y para …

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Agar	Reagent	Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)	DF0145-17-0 (214530)
Bacto-Peptone	Reagent	Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)	DF0118-17-0 (211677)
Yeast Extract	Reagent	Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)	DF0886-17-0 (288620)
Glucose