성인 Zebrafish에서 내이 (内耳) 감각 상피 조직의 총과 파인 해부 ( Danio rerio)
Summary
성인 zebrafish의 내이 (内耳) 감각 상피는 성인 척추 동물의 머리 세포 재생의 메커니즘을 이해하는 좋은 모델 시스템이다. 이 프로토콜은 우리가 휴대 전화와 subcellular 수준에서 재생 이벤트를 공부에 대한 조직 샘플을 얻을 수를 통해 상피 조직의 미세 절개를 보여줍니다.
Abstract
내이 (内耳)에 Neurosensory 상피 조직은 청력과 균형 기능에 중요한 구조입니다. 따라서, 그것은 주로 세포의 두 가지 유형으로 구성되어있는 상피 조직의 세포 및 분자 기능을 이해하는 것이 중요합니다 : 세포 (HCs) 및 지원 전지 (SCS). 여기서 우리는 상피 구조가 고도로 공부 모든 척추 동물에 보존되어 있기 때문에 성인 zebrafish뿐만 아니라에서 내이 (内耳) 감각 상피 조직을 연구하기 위해 선택할뿐만 아니라 성인 zebrafish는 HCs, 포유류는 출생 직후에 잃게하는 능력을 재생 할 수 있기 때문에. 우리는 HC 손실의 결과로 인간 심리 / 균형 적자의 임상 치료를 위해 도움이 될 수있는 성인 척추 동물의 내이 (内耳) HC 재생의 메커니즘을 연구하기위한 모델 시스템으로 성인 zebrafish의 내이 (内耳)를 사용합니다.
여기 우리는 성인 zebrafish에서 내이 (内耳) 감각 상피 조직의 총 훌륭한 해부를하는 방법을 보여줍니다. 총 해부는 내이 (内耳)를 둘러싼 조직을 제거하고 우리가 감각 상피 조직의 세부 구조를 검사할 수있는 조직 섹션을 준비하는 데 도움이됩니다. 미세 절개은 개별 상피의 비 – 감각 상피 조직을 깨끗이 치우고 전체 마운트 상피 샘플에서 쉽게 전체 상피의 이질을 검토하는 데 있습니다.
Protocol
Discussion
이 프로토콜에서는, 우리는 우리가 감각 상피 조직의 세포와 subcellular 기능을 공부에 대한 조직 샘플을 준비하는 수 성인 zebrafish의 내이 (内耳) 감각 상피 조직의 매출과 미세 절개를 설명했다.
성공적인 해부, 매우 첫 번째 단계, 고정을 수행하기 위해서는 매우 중요합니다. 이전 솔루션은 절개 중에 처리하기 어려운 조직의 밑에 – 고정의 결과 때문에 항상 신선한 paraformaldehy…
Acknowledgements
이 연구는 국가 인간 게놈 연구소, 건강의 국립 연구소의 교내 연구 프로그램에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| MS222 (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt) | Reagent | Sigma | A5040 | |
| PBS (Phosphate-buffered Saline, 10X) | Reagent | Mediatech | 46-013-CM | |
| Paraformaldehyde | Reagent | Sigma | P-6148 | |
| Triton X-100 | Reagent | Sigma | T8787 | |
| Alexa Fluor 488 phalloidin | Reagent | Invitrogen | A12379 | |
| VECTASHIELD Hard Set Mounting Medium with DAPI | Reagent | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Dissection microscope | Microscope | Nikon | SMZ1000 | |
| Insect pins | Tool | Fine Science Tools | 26000-40 | |
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| Tweezers | Tool | Roboz | RS-5045 | |
| Needle blade | Tool | Sharpoint | 78-6810 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Axiovert 200M | |
| Dissection pad | Tool | eNasco | SB07840M | |
| Zebrafish | Animal | various | n/a |
