在这段视频中,我们表现出的方法,通过它来分析生活在单细胞共聚焦显微镜分辨率的斑马鱼胚胎发育中的脊椎动物大脑。这包括我们注入单细胞的斑马鱼胚胎的方法,通过它,随后装载和图像的大脑发育。
在这段视频中,我们展示了我们的实验室已发展到分析细胞形态的变化和需要弯曲和折叠的发展斑马鱼脑(Gutzman等,2008)的重排的方法。这种分析提供了一次脊椎动物大脑的三维结构的发展所需的基本细胞生物学的新认识,并显着提高我们的能力,以研究神经管的形态发生。胚胎斑马鱼的大脑形脑室神经上皮内膨胀的开端,在18小时后受精(HPF)。 24 HPF,神经管的形态发生的最初步骤,是完整的。使用这里介绍的方法,在细胞阶段的胚胎基因编码的膜,有针对性的绿色荧光蛋白(memGFP)注射。后注射和孵化,胚胎,目前18至24 HPF,安装,倒置,在琼脂糖和激光共聚焦显微镜成像。值得注意的是,斑马鱼的胚胎是透明的,使其成为理想的荧光成像系统。虽然我们的分析集中在中脑,后脑边界和后脑,这种方法可以延长任何地区的分析,在深度为80-100微米的斑马鱼。
在这段视频中,我们表现出的mRNA注射到单细胞的斑马鱼胚胎的方法。在这里,我们使用一种膜定位GFP标记每个细胞的基因编码。然后,我们演示了如何安装和形象在单细胞分辨率的发育中的大脑。这项技术使我们能够研究一种新型的细胞形态变化,基部收缩,形成中脑,后脑边界(Gutzman等,2008)所需。类似的分析等现象有可能显着扩大我们对脊椎动物的形态发生和底层细胞生物学的理解。
谁最先开发这项技术在Sive实验室的博士詹妮弗Gutzman许多感谢。达纳 – 法伯癌症研究所的波士顿,马萨诸塞,慷慨地提供CAAX – GFP基因的质粒编码也感谢JB绿色。白石WM凯克基金会生物成像设施进行共焦成像。 HS是由NIHMH70926支持。 EG是支持由美国国家科学基金会博士后奖学金。