HC11 lactogenic 차별화는 mammospheres이라고 돔 구조의 형성에 의해 특징 수 있습니다. 구조 lactogenic 차별 quantifying에 투입 위상 콘트라스트 현미경에 의해 열거 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
일반적으로 내유 마우스 상피 세포 배양에 lactogenic 분화의 정도를 결정하는 데 사용 phenotypic 측정 mammospheres이라고 돔 모양의 세포 구조의 형성이다
프로토콜
- HC11 세포 10% 소태아 혈청, 5μg/ml 인슐린, 10 MM HEPES, 능력을 확립하기 위해 10ng/ml 표피 성장 인자 (EGF)와 보충 RPMI 1640 배지에서 6 일간 합류로 성장했다.
- 세포는 PBS로 씻어 24 시간 동안 EGF없이 성장 미디어에 유지했다.
- lactogenic 차별을 유발하는 세포 차별화 미디어, dexamethasone과 함께 즉 RPMI (10 -6 M), 인슐린 (5 μg / ML)과 같은 DIP라고 prolactin (5 μg / ML)에 incubated했다.
- 명시된 시간 이후 DIP 추가에서 mammospheres이 찍은 디지털 카메라 올림푸스 현미경 IX71를 사용하여 위상 콘트라스트 현미경에 의해 열거.
대표 결과 :
정상 내유 상피 세포 monolayers 여러 mammospheres의 낮은 전력 확대뿐만 아니라 단일 mammosphere의 높은 전력 배율은 각각 그림 1에 표시됩니다. 
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토론
위해서는이 기술에 대한 성공과 최고의 품질의 상피 세포가 lactogenic 호르몬으로 유도되고 이전에 합류 유지되어야합니다. 부량 어려운 만드는 수많은 mammospheres가있다 상황이있을 수 있습니다. 따라서, 정량 목적은 mammospheres의 숫자가 계산되는 수있는 때 시점에서 mammospheres을 사진에 좋습니다.
내유 상피 세포의 분화 lactogenic에 노출된 정도를 확인하는 데 사용되는 다양한 분자 마커가 있지만, 2D 문화 속에서 자란 세포를 사용 몇 형태학의 표식이있다. 우유 단백질이 누적될 수 모형 돔 구조를 형성 상피 세포 monolayers의 능력이 발달 과정에서 발생하는 형태학의 변경 사항 모니터링 할 수있는 모드를 제공합니다.
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감사의 글
Congressionally 감독 의학 연구 기금 부여 (DAMD17 - 01-0264)에서 ML 커틀러와 ML 커틀러하는 방법 United States 군사 암 연구소에 기금이 작업을 지원합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| RPMI | Invitrogen | 21870076 | |
| 소 태아 혈청(Fetal Bovine Serum) | Atlanta Biologicals | S11550 | |
| L-Glutamine | GIBCO, by Life Technologies | 25030 | |
| PenStrep | GIBCO, by Life Technologies | 15140 | |
| Hepes | Quality Biological, Inc. | 118089060 | |
| EGF | Sigma-Aldrich | E9644 | |
| 인슐린(Insulin) | GIBCO, by Life Technologies | 12585-014 | |
| 덱사메타손(Dexamethasone) | Sigma-Aldrich | D1756 | |
| 현미경 | Olympus Corporation | IX71 | |
| 디지털 카메라 | QImaging | Retiga 2000RV Fast 1394 |
참고문헌
- Blatchford, D. R., Hendry, K. A., Turner, M. D., Burgoyne, R. D., Wilde, C. J. Vectorial secretion by constitutive and regulated secretory pathways in mammary epithelial cells. Epithelial Cell Biol. 4, 8-16 (1995).
- Wang, W.
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재인쇄 및 허가
