gentleMACS Dissociator를 사용하여 마우스 폐 조직에서 단일 셀 Suspensions의 표준화 준비

Summary

특정 조직 유형의 세포를 Dissociating하면 조직의 동요에 대한 특정 매개 변수가 가능한, culturable 세포의 높은 볼륨을 얻기 위해 필요합니다. Miltenyi gentleMACS dissociator은 간단하고 실용적인 프로토콜이 작업을 최적화합니다. 이 발행물에서 폐 조직에서이 장치의 사용이 설명되어 있습니다.

Abstract

조직에서 단일 셀 suspensions의 준비 세포 연구에 많은 실험을위한 중요한 사전 요구 사항에 해당됩니다. 전체 장기 dissociating의 과정은 재현성 방식으로 가능한 세포의 높은 숫자를 얻기 위해서는 특정 매개 변수를 필요로합니다. gentleMACS Dissociator은 간단하고 실용적인 프로토콜이 작업을 최적화합니다. 악기는 마우스를 포함하여 폐 조직 유형의 다양한 효율적이지만 부드러운 분리에 최적화된 미리 프로그램된 설정이 포함되어 있습니다. 이 간행물의 생쥐에서 파생된 폐 조직에 gentleMACS의 Dissociator의 사용을 시연합니다.

Protocol

무균 조건 하에서 해결하려면, 그것은 층류 후드의 모든 단계를 수행하는 것이 좋습니다. 1. 자료 HEPES 버퍼 : 10 MM HEPES – NaOH 산도 7.4, 150 MM NaCl, 5 KCl MM, 1 MM MgCl 2, 1.8 MM CaCl 2) Collagenase D 솔루션 : Collagenase D : 100 MG / ML (Collagenase D> 0.15 U / MG) HEPES에서 버퍼 DNase I 솔루션 : 20,000 U / ML DNase I 산도 7.2에서 PBS 버퍼 PEB 버퍼 : 20 부품…

Discussion

이 비디오에서는, 우리는 마우스 폐 조직의 분리를위한 새로운 방법을 소개합니다. 저희는 폐 조직의 기계적 효소 치료의 조합이 가능한 leukocytes 및 내피 세포의 높은 비율을 알아낼 것을 보여줍니다. 특히, 조직의 기계적 붕괴는 gentleMACS의 Dissociator에 의해 달성되었다. 고정자 시스템, 부드러운 방식으로 dissociates 조직 – gentleMACS C 튜브는 로터가 포함되어 있습니다. 절차는 악기의 프로그램 설정?…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
C Tubes		Miltenyi Biotec	Order no. 130-093-237	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx
gentleMACS™ Starting Kit		Miltenyi Biotec	Order no. 130-093-235	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx
MACSmix™ Tube Rotator		Miltenyi Biotec	Order no. 130-090-753	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx
autoMACS™ Rinsing Solution		Miltenyi Biotec	Order no. 130-091-222	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx
MACS® BSA Stock Solution		Miltenyi Biotec	Order no. 130-091-376	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx
CD11c MicroBeads		Miltenyi Biotec	Order No. 130-052-001	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx
CD11c-FITC, CD11c-PE		Miltenyi Biotec	Order no. 130-092-026 130-091-830	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx
Anti-mPDCA-1-APC		Miltenyi Biotec	Order no. 130-091-963	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx
CD146-FITC		Miltenyi Biotec	Order no. 130-092-026	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx
CD45-PE		Miltenyi Biotec	Order no. 130-091-610	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx
Propidium Iodide Solution		Miltenyi Biotec	Order no. 130-093-233	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx
Art 1000 Reach Pipet Tips		Molecular BioProducts	Order no. 2079	http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61 http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html