Summary

Стандартизированные Подготовка одноклеточных суспензий от мыши легочной ткани использованием gentleMACS диссоциатор

Published: July 02, 2009
doi:

Summary

Диссоциирующего клетки определенных типов ткани требует специфических параметров для агитации ткани для получения большого количества жизнеспособных, culturable клеток. Miltenyi gentleMACS диссоциатор оптимизирует эту задачу с простым, практичным протокола. В этой публикации использование этого аппарата на легочной ткани объясняется.

Abstract

Подготовка одноклеточных суспензий из тканей является важной предпосылкой для многих экспериментов в сотовых исследований. Процесс диссоциации целые органы требует специфических параметров, чтобы получить большое количество жизнеспособных клеток в воспроизводимым образом. GentleMACS диссоциатор оптимизирует эту задачу с простым, практичным протокола. Инструмент содержит предварительно запрограммированными настройками, которые оптимизированы для эффективной, но нежный диссоциации различных типов тканей, в том числе мыши легких. В этой публикации использование диссоциатор gentleMACS на легочную ткань производным от мышей показано.

Protocol

Для работы в стерильных условиях, то рекомендуется выполнять все шаги в ламинарном боксе. 1. Материалы HEPES буфера: 10 мМ HEPES-NaOH рН 7,4, 150 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 1 мМ MgCl 2, 1,8 мМ CaCl 2) Коллагеназа D решение: Коллагеназа D: 100 мг / мл (коллагеназы D> 0,15 ЕД / мг), в HEPES буфере </li…

Discussion

В этом видео, мы вводим новый метод диссоциации легочной ткани мыши. Мы показали, что сочетание механических и ферментативных лечения легочной ткани дали высокий процент жизнеспособных лейкоцитов и эндотелиальных клеток. В частности, механические распада тканей было достигнуто за сч?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Авторы являются сотрудниками Miltenyi Biotec GmbH, Германия.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
C Tubes   Miltenyi Biotec Order no. 130-093-237 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx
gentleMACS™ Starting Kit   Miltenyi Biotec Order no. 130-093-235 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx
MACSmix™ Tube Rotator   Miltenyi Biotec Order no. 130-090-753 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx
autoMACS™ Rinsing Solution   Miltenyi Biotec Order no. 130-091-222 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx
MACS® BSA Stock Solution   Miltenyi Biotec Order no. 130-091-376 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx
CD11c MicroBeads   Miltenyi Biotec Order No. 130-052-001 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx
CD11c-FITC, CD11c-PE   Miltenyi Biotec Order no. 130-092-026 130-091-830 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx
Anti-mPDCA-1-APC   Miltenyi Biotec Order no. 130-091-963 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx
CD146-FITC   Miltenyi Biotec Order no. 130-092-026 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx
CD45-PE   Miltenyi Biotec Order no. 130-091-610 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx
Propidium Iodide Solution   Miltenyi Biotec Order no. 130-093-233 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx
Art 1000 Reach Pipet Tips   Molecular BioProducts Order no. 2079 http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61
http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html
check_url/kr/1266?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator. J. Vis. Exp. (29), e1266, doi:10.3791/1266 (2009).

View Video