내유 이미징 창문 Dendra2 Photoswitching
Summary
내유 이미징 창을 통해 Dendra2 – 라벨 종양 세포의 Intravital photoswitching 및 추적은 우리가 이미지 일 timescale 이상 선택 종양의 microenvironments에서 종양 세포의 전이성 동작을 수있는 기술입니다.
Abstract
단일 셀 해상도 마우스 및 쥐의 유방 종양의 지난 10 년, intravital 현미경<sup> 1-4</sup>는 마이 그 레이션, 침략과 종양 세포의 intravasation로 전이성 행동의 메커니즘에 중요한 통찰력을 초래했다<sup> 5, 6</sup>, angiogenesis<sup> 3</sup> 그리고 면역 세포 응답<sup> 7-9</sup>. 우리는 최근 생활 생쥐에서 여러 intravital 이미징 세션을 통해 이미지 orthotopic 내유 carcinomas하는 기술을보고<sup> 10</sup>. 이를 위해, 우리는 Dendra2위한 내유 이미징 창 (MIW) 및 최적화된 이미지 매개 변수를 개발<sup> 11</sup> photoswitching 및 이미징<em> 생체내에</em>. 여기, 우리는 MIW, 사용자 지정 기본 이미지 상자를 사용하여 Dendra2 – 라벨 종양 세포의 종양 및 이미징 위에 MIW 삽입의 제조에 대한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 이미지 종양의 독특한 microenvironments에서 종양 세포의 전이성 동작을하는 데 사용하고 혈관, 종양 세포와 호스트 세포의 장기 이미징을 허용하실 수 있습니다.
Protocol
Acknowledgements
(; JC, JES 및 JW하는 CA100324, JvR에 U54GM064346 JES하는 CA77522, JC와 BG에 U54CA126511)이 작품은 미국 국방과 (BG 및 DK로 BC061403 BC075554로), 건강의 미국 국립 연구소에 의해 지원되었다. 우리는 현미경, 이미징 상자와 F4/80 항체에 대한 J. 폴라드 (의학의 앨버트 아인슈타인 대학)의 제조에 대한 도움 M. Rottenkolber에 대한 도움말 D. Entenberg 감사합니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PBS w/o Ca, Mg | Gibco | 14190-144 | ||
| Trypsin | Gibco | 25300 | ||
| HBSS | Gibco | 14025 | ||
| DMEM media (MDA-MB-231 cells) | Gibco | 11965 | ||
| Isoflurane(Aerrane) | Baxter | # NDC 10019-773-40 | ||
| SCID mouse | NCI | N/A | ||
| Culture dishes | BD Falcon | 353003 | Custom Order | |
| Circular coverslip 8 mm | Scientific, Inc. | 8CIR-1-FIS |
References
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