photoswitching Intravital وتتبع Dendra2 المسمى الخلايا السرطانية من خلال نافذة الثديية التصوير هو الأسلوب الذي يسمح لنا صورة السلوك المنتشر من الخلايا السرطانية في الورم microenvironments اختيار أكثر من مقياس من الأيام.
Abstract
في العقد الماضي ، الفحص المجهري intravital من أورام الثدي في الفئران والجرذان وحيدة الخلية في القرار<sup> 1-4</supوقد أدى> في نظرات ثاقبة في آليات السلوك المنتشر مثل الغزو والهجرة وintravasation الخلايا السرطانية<sup> 5 ، 6</sup> ، الأوعية الدموية<sup> 3</sup> استجابة مناعية وخلايا<sup> 7-9</sup>. وقد أبلغنا مؤخرا تقنية لسرطان الثدي صورة مثلي على عدة دورات في التصوير intravital الفئران الحية<sup> 10</sup>. لذلك ، قمنا بتطوير إطار التصوير الثديية (MIW) والمعلمات التصوير الأمثل لDendra2<sup> 11</sup> photoswitching والتصوير<em> في الجسم الحي</em>. هنا ، نحن تصف البروتوكول لتصنيع MIW ، أو الإدراج من MIW على رأس الورم والتصوير من الخلايا السرطانية التي تحمل علامات Dendra2 باستخدام مربع مخصصة التصوير بناؤها. ويمكن استخدام هذا البروتوكول لصورة السلوك المنتشر من الخلايا السرطانية في microenvironments متميزة في الأورام ، ويسمح للتصوير على المدى الطويل من الأوعية الدموية والخلايا السرطانية والخلايا المضيفة.
Protocol
1. جيل من الأورام الفلورسنت باستخدام حقن الخلايا السرطانية في الثدي وسادة من الدهون : تنمو الخلايا معربا عن خط Dendra2 البروتين (كعلامة هيولي) إلى 40 — 80 ٪ confluency. شطف الأطباق على الأقل 3 مرات مع PBS ث …
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل وزارة الدفاع الأميركية (BG BC075554 لوBC061403 إلى DK) الأميركية ، والمعاهد الوطنية للصحة (U54GM064346 لJvR ؛ CA100324 إلى JC ، JES وJW ؛ CA77522 لJES ، U54CA126511 إلى JC وBG). نشكر دال Entenberg للحصول على مساعدة المجهري ، M. Rottenkolber للمساعدة في تصنيع مربع التصوير وياء بولارد (كلية ألبرت آينشتاين للطب) للأجسام المضادة F4/80.
Gligorijevic, B., Kedrin, D., Segall, J. E., Condeelis, J., van Rheenen, J. Dendra2 Photoswitching through the Mammary Imaging Window. J. Vis. Exp. (28), e1278, doi:10.3791/1278 (2009).