Dendra2 Photoswitching a través de la ventana de imágenes mamarias
Summary
Photoswitching intravital y el seguimiento de Dendra2 marcado con las células tumorales a través de la ventana de imagen mamaria es una técnica que nos permite la imagen del comportamiento metastático de las células tumorales en los microambientes tumor elegido por un plazo de días.
Abstract
En la última década, la microscopía intravital de los tumores de mama en ratones y ratas en una sola célula de resolución<sup> 4.1</sup> Ha dado lugar a importantes conocimientos sobre los mecanismos de comportamiento metastásico como la migración, invasión y intravasation de las células tumorales<sup> 5, 6</sup>, La angiogénesis<sup> 3</sup> Y la respuesta de las células inmunes<sup> 9.7</sup>. Recientemente hemos informado de una técnica de imagen de mama carcinomas ortotópico a través de múltiples sesiones de imagen intravital en ratones vivos<sup> 10</sup>. Para ello, hemos desarrollado una ventana de imagen Mamaria (MIW) y los parámetros optimizados de imagen para Dendra2<sup> 11</sup> Photoswitching e imágenes<em> In vivo</em>. Aquí se describe el protocolo para la fabricación de MIW, la inserción de la MIW en la parte superior de un tumor y la imagen de las células tumorales Dendra2 marcado con una caja de encargo construido de imágenes. Este protocolo se puede utilizar para la imagen del comportamiento metastático de las células tumorales en diferentes microambientes en los tumores y permite obtener imágenes a largo plazo de los vasos sanguíneos, las células tumorales y las células huésped.
Protocol
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por los EE.UU. Departamento de Defensa (BC075554 a BG y BC061403 a DK), EE.UU. Institutos Nacionales de Salud (U54GM064346 a JvR; CA100324 a JC, JES y JW, CA77522 a JES, U54CA126511 a JC y BG). Damos las gracias a D. Entenberg para ayudar con el microscopio, M. Rottenkolber para ayudar en la fabricación de la caja de imagen y J. Pollard (Albert Einstein College of Medicine) para el anticuerpo F4/80.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PBS w/o Ca, Mg | Gibco | 14190-144 | ||
| Trypsin | Gibco | 25300 | ||
| HBSS | Gibco | 14025 | ||
| DMEM media (MDA-MB-231 cells) | Gibco | 11965 | ||
| Isoflurane(Aerrane) | Baxter | # NDC 10019-773-40 | ||
| SCID mouse | NCI | N/A | ||
| Culture dishes | BD Falcon | 353003 | Custom Order | |
| Circular coverslip 8 mm | Scientific, Inc. | 8CIR-1-FIS |
References
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