Meme Görüntüleme Penceresi ile Dendra2 etiketli tümör hücrelerinin intravital photoswitching ve izleme, bize görüntü gün bir zaman ölçeği üzerinde seçilen tümör mikroçevrelerde tümör hücrelerinin metastatik davranış sağlayan bir tekniktir.
Abstract
Tek hücreli çözünürlükte fare ve sıçanlarda son on yıl içinde, meme tümörlerinin intravital mikroskopi<sup> 1-4</sup> Mekanizmaları, göç, istila ve tümör hücrelerinin intravasation gibi metastatik davranışı önemli bilgiler sonuçlandı<sup> 5, 6</sup> Anjiyogenez<sup> 3</sup> Ve bağışıklık hücrelerinin tepki<sup> 7-9</sup>. Biz son zamanlarda birden çok intravital görüntüleme oturumda yaşayan farelerde görüntü ortotopik meme karsinomları için bir teknik bildirdin<sup> 10</sup>. Bunun için, biz Dendra2 Meme Görüntüleme Pencere (MIW) ve optimize edilmiş görüntüleme parametreleri geliştirdik<sup> 11</sup> Photoswitching ve görüntüleme<em> In vivo</em>. Burada, biz, özel bir görüntüleme kutusunu kullanarak Dendra2 etiketli tümör hücrelerinin bir tümör görüntüleme ve üstüne MIW ekleme MIW üretim için protokol tanımlar. Bu protokol görüntü metastatik tümörlerde belirgin mikroçevrelerde tümör hücrelerinin davranış için kullanılır ve kan damarları, tümör hücreleri ve ana hücreleri uzun süreli görüntüleme sağlar.
Protocol
1. Floresan tümörlerin meme yağ yastığı içine tümör hücrelerinin enjeksiyonu kullanarak Üretimi: % 80 confluency – 40 Dendra2 protein (sitoplazmik bir belirteci olarak) ifade eden bir hücre hattı büyütün. PBS w / o Ca 2 yemekleri en az 3 kez durulayın + veya Mg 2 +. 37 10 cm çanak ve inkübe başına 3 ml tripsin ekle ° C hücrelerinin çoğu ayırmak ve daha sonra düz bir yüzeye karşı çanak vurmak sallamak kadar. Çanak ka…
Acknowledgements
(; JC, JES ve JW CA100324; JvR için U54GM064346 JES CA77522, JC ve BG U54CA126511) Bu çalışma, ABD Savunma Bakanlığı'nın (BG ve DK BC061403 BC075554), ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmiştir. D. Entenberg mikroskopi, görüntüleme kutusu ve J. Pollard (Albert Einstein Tıp Koleji) F4/80 antikor üretiminde yardım M. Rottenkolber ile yardım için teşekkür ederim.
Gligorijevic, B., Kedrin, D., Segall, J. E., Condeelis, J., van Rheenen, J. Dendra2 Photoswitching through the Mammary Imaging Window. J. Vis. Exp. (28), e1278, doi:10.3791/1278 (2009).