בקנה מידה גדול immunodetection של חלבונים יעד ברחבי המוח הפרימטים כולו ניתן על ידי העסקת רקמה רומן הטבעה וכן חתך שיטות בשילוב עם השימוש במנגנון יצירתיים מכתים אצווה של ריחוף ללא מקטעים מרובים בכל זמן נתון.
Abstract
אימונוהיסטוכימיה (IHC) הוא אחד טכניקות מעבדה הנפוצה ביותר לצורך זיהוי של חלבונים היעד<em> באתרו</em>. שאלות בנוגע דפוס הביטוי של חלבון מטרה ברחבי המוח כולו קל יחסית לענות בעת שימוש IHC במוח קטן, כמו אלה של מכרסמים. עם זאת, לענות על אותן שאלות במוח גדול ומסורבל, כמו אלה של פרימטים מציג מספר אתגרים. כאן אנו מציגים גישה שיטתית עבור immunodetection של חלבונים היעד במוח קוף בוגר. גישה זו מסתמכת על הרקמה הטבעה וכן חתך מתודולוגיה of Neuroscience Associates (NSA), כמו גם כלים שפותחו במיוחד עבור מכתים אצווה של ריחוף ללא סעיפים. התוצאה היא מכתים אחידה של קבוצה של סעיפים אשר, במרווח מסוים, מייצג את המוח כולו. סעיפים מוכתם וכתוצאה מכך יכולה להיות נתונה למגוון רחב של נהלים אנליטיים על מנת למדוד את רמות החלבון, אוכלוסיית נוירונים לבטא חלבון מסוים.
Protocol
Immunohistochemisty היא אחת הטכניקות הנפוצה ביותר לאפיון ביטוי חלבון במוח של שונות במודלים של בעלי חיים ניסיוניים. קל יחסית לנהל הליכים immunohistochemical שיטתי על מוחותיהם של מכרסמים אחרים מודלים ניסיוניים משותף עם מוח בגודל דומה. עם זאת, אין עבודה שפורסם לידע שלנו המספק תיאור מקיף ?…
Discussion
ישנם שני שלבים קריטיים בהליך זה שהופכים בקנה מידה גדול זיהוי של חלבונים במוח הקוף כל האפשר. האחד הוא פרוטוקול הטבעה ואת חתך, אשר נשאר הידע הקנייני של NSA. השני הוא השימוש של מנות מכתים וסלים מסופק על ידי HistoTools. זו האחרונה מאפשרת טיפול קל ומהיר של (~ 40) קטעים רבים בזמן נתון….
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו מודים פרנק ארווין, רוברטה Palmour ואנשי מדעי ההתנהגות קרן מעבדות ממוקם בסנט קיטס, הודו המערבית, על המשך התמיכה עבודתם הפרימטים שלנו. עבודה זו נתמכה על ידי מענק של X השביר קרן המחקר של קנדה (FXRFC) כדי SZ ו – מענקים ההפעלה המכונים הקנדי לבריאות מחקר (AC) ועל הנדסת הלאומי מועצת המחקר של קנדה (MP).
Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain. J. Vis. Exp. (29), e1286, doi:10.3791/1286 (2009).