साबुत बंदर के मस्तिष्क में बड़े पैमाने पर प्रोटीन पता लगाने के लिए बैच Immunostaining
Summary
पूरे रहनुमा मस्तिष्क भर में लक्ष्य प्रोटीन की बड़े पैमाने पर immunodetection उपन्यास ऊतक रोजगार एम्बेडिंग और एक निश्चित समय पर एकाधिक मुक्त अस्थायी वर्गों के बैच धुंधला के लिए रचनात्मक उपकरण के उपयोग के साथ संयुक्त तरीकों सेक्शनिंग द्वारा ही संभव है.
Abstract
Immunohistochemistry (आईएचसी) लक्ष्य प्रोटीन का पता लगाने के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल प्रयोगशाला तकनीकों में से एक है<em> बगल में</em>. पूरे मस्तिष्क भर में एक लक्ष्य प्रोटीन की अभिव्यक्ति पैटर्न से संबंधित प्रश्न अपेक्षाकृत आसान जवाब जब कृन्तकों की उन जैसे छोटे दिमाग में आईएचसी का उपयोग कर रहे हैं. हालांकि, primates के उन जैसे बड़े और जटिल दिमाग में एक ही सवाल का जवाब चुनौतियों का एक संख्या प्रस्तुत करता है. यहाँ हम एक वयस्क बंदर के दिमाग में एक लक्ष्य प्रोटीन की immunodetection लिए एक व्यवस्थित दृष्टिकोण प्रस्तुत करते हैं. इस दृष्टिकोण एम्बेडिंग और सेक्शनिंग न्यूरोसाइंस एसोसिएट्स की पद्धति (एनएसए) के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मुक्त अस्थायी वर्गों के बैच धुंधला के लिए विशेष रूप से विकसित उपकरणों के ऊतकों पर निर्भर करता है. यह वर्गों का एक सेट है, जो एक विशेष अंतराल पर पूरे मस्तिष्क का प्रतिनिधित्व करता है की वर्दी धुंधला में परिणाम है. परिणामस्वरूप दाग वर्गों विश्लेषणात्मक प्रक्रियाओं की एक विस्तृत विविधता के अधीन किया जा सकता है क्रम में करने के लिए प्रोटीन का स्तर, एक निश्चित प्रोटीन व्यक्त न्यूरॉन्स की आबादी को मापने.
Protocol
Discussion
इस प्रक्रिया में दो महत्वपूर्ण कदम है कि एक पूरे बंदर संभव मस्तिष्क में बड़े पैमाने पर प्रोटीन का पता लगाने के हैं. एक एम्बेड और सेक्शनिंग प्रोटोकॉल, जो एनएसए के स्वामित्व ज्ञान रहता है. अन्य धुंधला व्?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम फ्रैंक Ervin, रोबर्टा Palmour और व्यवहार विज्ञान फाउंडेशन हमारे रहनुमा काम के अपने निरंतर समर्थन के लिए, वेस्ट इंडीज, सेंट किट्स में स्थित प्रयोगशालाओं के कर्मचारियों के लिए आभारी हैं. स्वास्थ्य अनुसंधान (एसी) और राष्ट्रीय इंजीनियरिंग और अनुसंधान परिषद के कनाडा (सांसद) की कनाडा के संस्थानों से ऑपरेटिंग अनुदान – यह काम नाजुक एक्स कनाडा की रिसर्च फाउंडेशन (FXRFC) SZ करने के लिए और से एक फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| anti-FMRP monoclonal antibody | Chemicon | MAB2160 | Requires antigen retrieval in fixed tissue. | |
| anti-NeuN monoclonal antibody | Chemicon | MAB377 | N/A | |
| anti-Neurofilament H monoclonal antibody | Sternberger Monoclonals Inc. | SMI32 | N/A | |
| Antigen Unmasking Solution | Vector Laboratories | H-3300 | N/A | |
| Normal horse serum | Invitrogen | 16050122 | 500 mL | |
| Biotinylated Anti-Mouse IgG (H+L), made in horse | Vector Laboratories | BA-2000 | ||
| VECTASTAIN ABC Kit (Standard) | Vector Laboratories | PK-4000 | 1.5 mg | |
| Staining dish for floating sections | HistoTools | 10009 | 12 x 65 mm | |
| Staining transport basket | HistoTools | 10012 | large (fits 12 x 65 mm dish) |
|
| Triton X-100 | Fisher Scientific | P8514B | N/A | |
| DAB | Fisher Scientific | AC11209-0050 | N/A |
References
- Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. . Guide to the Care and Use of Experimental Animals. , (1993).
- Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of a fragile X premutation. Nat Genet. 4, 335-340 (1993).
- Mullen, R. J., Buck, C. R., Smith, A. M. NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates. Development. 116, 201-211 (1992).
- Sternberger, L. A., Sternberger, N. H. Monoclonal antibodies distinguish phosphorylated and nonphosphorylated forms of neurofilaments in situ. Proc Natl Acad Sci U S A. 80, 6126-6130 (1983).
