Denna teknik exponerar Drosophila embryonala neuromusculature för immunohistokemi eller elektrofysiologiska inspelning. Det är användbart för att studera tidiga händelser i neuromuskulär utveckling eller utföra elektrofysiologiska i mutanter som inte kan kläckas.
Drosophila är en förstklassig genetisk modell för studier av såväl embryonal utveckling och funktionell neurovetenskap. Tidigare har dessa fält helt isolerade från varandra, med i stort sett oberoende historia och vetenskapliga samfund. Dock är gränssnittet mellan dessa oftast skilda områden utvecklingsarbetet program som ligger bakom förvärvet av funktionella elektriska signalering egenskaper och differentiering av funktionella kemiska synapser under de sista faserna av neural krets bildas. Detta gränssnitt är ett mycket viktigt område för utredning. I Drosophila, dessa faser av funktionell utveckling sker under en period av <8 timmar (vid 25 ° C) under den sista tredjedelen av fosterutvecklingen. Denna sena utveckling period ansågs länge svårlösta för undersökning på grund av deponering av en tuff och tät yta epidermal nagelband. Ett genombrott förskott var tillämpningen av vatten-polymerisation kirurgiskt lim som kan vara lokalt tillämpas på nagelbanden för att kontrollerad dissekering av sena embryon. Med ett rygg-längsgående snitt, kan embryot läggas platt, utsätta den ventrala nerven sladden och kropp vägg muskulatur till experimentella undersökningar. Detta system har varit starkt användas för att isolera och karakterisera genetiska mutanter som försämrar embryonala synaps bildning, och därmed avslöjar de molekylära mekanismer som styr specifikation och differentiering av synaps anslutningar och funktionella synaptisk signalering egenskaper.
Exakt stadieindelning av embryon är kritisk på grund av den snabba mognaden av funktionella egenskaper under tiden loppet av bara några timmar. Flera frågor komplicerar denna iscensättning. Först de flesta forskare använder tidsinställda ägg lägger till steg embryon, men äggläggning kan variera enormt från djur till djur i olika förhållanden (Broadie et al. 1992). I synnerhet kvinnor på en begränsad diet tenderar att behålla befruktade ägg under långa perioder före om. Det är därför viktigt att &…
KB stöds av NIH bidrag GM54544.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Embryo Collection Cages | Genesee Scientific (www.flystuff.com) | 59-100 (for 60 mm dish; other sizes available) | Cages can also be home made using punctured tri-pour beakers, as shown in video | |
Sylgard 184 | Dow Corning | Available from various companies | Surgical glue adheres better to sylgard-coated coverslips | |
Fine glass tubing, outer diameter 1.0-1.5 mm | various | For pulling into fine glass needles for dissection and tubes for glue delivery | ||
Plastic tubing, to attach to glass pipette for mouth suction and glue application | Tygon | Tubing inner diameter needs to match glass outer diameter. |