无有机溶剂和醋酸，蛋白质与考马斯亮蓝G - 250凝胶染色
Summary
蛋白质与考马斯亮蓝（CBB）的G – 250在聚丙烯酰胺凝胶染色的一个短的协议是在古典与CBB染色程序，而无需使用有机溶剂或醋酸。
Abstract
在古典蛋白染色用考马斯亮蓝（CBB）与有毒和易燃的有机溶剂（甲醇，乙醇或异丙醇）和乙酸含量高的解决方案的协议是用于固定，染色和脱色凝胶中的蛋白质经SDS – PAGE分析。为了加快程序，在很短的时间微波炉加热的染色溶液是常用的。这通常会导致有毒或有害的甲醇，乙醇或异丙醇和醋酸在实验室应避免由于安全方面的考虑的强烈气味的挥发。在最初两个EM Wondrak（US2001046709（A1），US6319720（B1））专利申请公布一个协议，染色液的另一种成分是其中不含有机溶剂或酸是用来描述。溶解在bidistilled水的CBB（CBB G – 250每公升60 – 80毫克）和35毫米盐酸是作为唯一的染色溶液中的其他化合物的补充。 CBB staning凝胶完成后bidistilled水凝胶的SDS – PAGE和彻底清洗。通过加热凝胶在洗涤和染色步骤，完成这个过程可以更快，任何有毒或有害compunds蒸发。染色的蛋白质发生已经在1分钟内加热后的凝胶染色溶液和全面发展与略带蓝色的背景，完全是destained长时间洗染色bidistilled水凝胶后15-30分钟，而不会影响染色的蛋白质，带。
Protocol
第1部分：CBB染色溶液的制备 60-80毫克CBB G – 250是在1升bidistilled水溶解，搅拌2-4小时。最后，3毫升浓盐酸加入搅拌一分钟，以深蓝色的解决方案，并存储在黑暗供日后使用。该解决方案可存储几个星期到几个月的时间，而不会失去其染色效率。 浓盐酸应处理与常规护理UND通风柜下使用。最终的解决方案将在pH为2左右，所以手套，应使用和任何应避免与皮肤接触。 <p class="j…
Discussion
- 洗涤步骤是为高效的蛋白质染色是至关重要的。 2分以下或水（<50毫升）的体积缩小减少洗涤时间，可以在淡蓝色的蛋白条带，最有可能由于凝胶中残留的SDS的结果。
- 如果蛋白质质谱分析，在微波炉中加热的步骤应跳过，扩展到约10分钟，每一步和染色时间延长，直到带的强度凝胶洗涤时间足够强大。加热质谱的蛋白质的交联凝胶的凝胶基质，从而检测的蛋白质可能会受到阻碍。
- 相反的CBB G – …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
，我们愿意承认的伊内斯拉克的技术援助。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Coomassie Brilliant Blue G-250 | AppliChem | A3480 | any other CBB G-250 could be used as well | |
| Concentrated HCl |
References
- Wondrak, E. M. Process for fast visualization of protein. US patent. , (2001).
- Wondrak, E. M. Solution for fast visualization of protein. US patent. , (2001).
Cite This Article
Lawrence, A., Besir, H. Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid. J. Vis. Exp. (30), e1350, doi:10.3791/1350 (2009).