Мышиной модели болезни Паркинсона: от 6-ОН Допамин Поражение в поведенческих испытаний
Summary
Паркинсона болезнь вызвана потерей дофаминергических иннервации стриатума, которые могут быть экспериментально индуцированных 6-ОН-допамина. Мы опишем, как выполнять стереотаксической поражения и следить апоморфина вызванных вращательное поведение у мышей. Эта модель является полезным и надежным для тестирования новых методов лечения болезни Паркинсона.
Abstract
Болезнь Паркинсона (БП) влияет не менее 6,5 миллиона человек по всему миру, независимо от пола, социальных, этнических, экономических или географических границ. Основные симптомы, такие как тремор, ригидность и bradikinesia, развиваться, когда около 3 / 4 дофаминергических клетки теряются в черной субстанции, а не обеспечить гладкий, скоординированного регулирования полосатой схем двигателя. Депрессия и галлюцинации являются общими, и слабоумие в конечном итоге происходит у 20% пациентов. В настоящее время нет лечения, чтобы задержать или остановить прогрессирование БП. Скорее всего, препараты в настоящее время цель в большей степени на смягчение этих симптомов. Новые хирургические методы могут обратимо включить функционально поврежденных цепей посредством электрической стимуляции глубоких структур головного мозга, но, хотя глубокая стимуляция мозга является важным шагом вперед, он не подходит для всех пациентов. Остается поэтому необходимо апробировать новые подходы клеточной терапии в доклинических моделях.
Селективный нейротоксическое нарушение дофаминергических путей могут быть воспроизведены с помощью инъекций 6-hydroxydopamine (6-OHDA) или МФТП (1-метил-4-фенил-1 ,2,3,6-tertahydropyridine), тогда как разрушающие лекарства и окислительно-вредных веществ может также воспроизводить особенности PD у грызунов. В отличие от МФТП, 6-OHDA поражения вызывают массовые необратимой потерей нейронов, и может быть одно-или двусторонним. 6-OHDA поражения модель является надежным, приводит к дефициту надежный двигатель, и является наиболее широко используемым после 40 лет исследований в rats1. Как взаимодействий между трансплантированных клеток и принимающих теперь могут быть изучены более тщательно на мышах, а не на крысах, модель была перенесена на мышах 2,3, где он был недавно характеризуется 4.
В этом видео, мы показали, как поражение левой Нигро-полосатой путь анестезии мышей медленно доставки 2,0 мкл 6-OHDA через stereotaxically вставляется микро-иглы шприца. Потеря дофаминергических ввод происходит в течение нескольких дней, и функциональных нарушений можно наблюдать за послеоперационной недели и месяцы, по рейтингу животных вращения индуцированной агентами дофаминергических 5. Здесь мы покажем, всего тела контралатеральной повороты происходят через 10 минут после однократного введения подкожного апоморфина, измеренное через месяц после поражения. Результаты и недостатки будут рассмотрены ниже.
Protocol
Discussion
Обширные одностороннем поражении Нигро-полосатой пути может быть достигнуто надежно у мышей одной стереотаксической инъекции 6-OHDA в полосатом теле. Степень поражения может быть проверена посмертного по иммуногистохимии для тирозингидроксилазы (которая катализирует скорость лимити?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Поддержка Fundação де Ампаро Pesquisa сделать Estado-ду-Риу-де-Жанейро (FAPERJ) и Conselho Насьональ де Desenvolvimento Científico электронной Tecnológico (CNPq). Мы благодарны анонимным рецензентам, чьи комментарии помогли нам улучшить как рукопись и видео.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ketamine hydrochloride | König | 90-120 mg/Kg | ||
| Xylazine hydrochloride | König | 10 mg/Kg | ||
| Atropine Sulfate | Isofarma | Isofarma | ||
| 6 – Hydroxydopamine Hydrochloride | Sigma-Aldrich | 5 μg/μL | ||
| L – Ascorbic Acid | USB Corporation | 0.2% | ||
| Xylocaine (Lidocaine Chloridrate) |
ASTRA Chemistry | 5% 50 mg |
||
| Nebacetin (Neomycin Sulfate + Bacitracin) | Altana Pharma | 5 mg/g + 250 Ul/g | ||
| R-(-)-Apomorphine hydrochloride | Sigma-Aldrich | 0.5 mg/Kg | ||
| GenTeal lOphthalmic ointment Hypromellose |
NOVARTIS | 0.33% |
||
| Ibuprofen | Abbott | 4 mg/ 100 ml drinking water | ||
| Povidine | JohnsonDiversey | |||
| R-(-)-Apomorphine hydrochloride | Sigma-Aldrich | 0.5 mg/Kg |
References
- Ungerstedt, U. 6-hydroxy-dopamine induced degeneration of central monoamine neurons. Eur. J. Pharmacol. 5, 107-110 (1968).
- Akerud, P., Canals, J. M., Snyder, E. Y., Arenas, E. Neuroprotection through delivery of glial cell line-derived neurotrophic factor by neural stem cells in a mouse model of Parkinson’s Disease. J. Neurosci. 21, 8108-8118 (2001).
- Ghosh, A., Roy, A., Liu, X., Kordower, J. H., Mufson, E. J., Hartley, D. M., Ghosh, S., Mosley, R. L., Gendelman, H. E., Pahan, K. Selective inhibition of NF-kappaB activation prevents dopaminergic neuronal loss in a mouse model of Parkinson’s Disease. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 104, 18754-18759 (2007).
- Alvarez-Fischer, D., Henze, C., Strenzke, C., Westrich, J., Ferger, B., Höglinger, G. U., Oertel, W. H., Hartmann, A. Characterization of the striatal 6-OHDA model of Parkinson’s disease in wild type and a-synuclein-deleted mice. Exp. Neurol. 210, 182-193 (2008).
- Ungerstedt, U. 6-Hydroxydopamine-induced degeneration of the nigrostriatal dopamine pathway: The turning syndrome. Pharmacology and Therapeutics Part B: General and Systematic Pharmacology. 2, 37-40 (1976).
- . . Guidelines for the Care and Use of Mammals in Neuroscience and Behaviour Research. , 209 (2003).
- Franklin, K. B. J., Paxinos, G. . The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).
- Hudson, J. L., Horne, C. G. v. a. n., Strömberg, I., Brock, S., Clayton, J., Masserano, J., Hoffer, B. J., Gerhardt, G. A. Correlation of apomorphine- and amphetamine-induced turning with nigrostriatal dopamine content in unilateral 6-hydroxydopamine lesioned rats. Brain Res. , 626-6167 (1993).
- Truong, L., Allbutt, H., Kassiou, M., Henderson, J. M. Developing a preclinical model of Parkinson’s disease: A study of behaviour in rats with graded 6-OHDA lesions. Behav. Brain Res. 169, 1-9 (2006).
- Harvey, B. K., Wang, Y., Hoffer, B. J. Transgenic rodent models of Parkinson’s disease. Acta Neurochir. (Wien.). 101, 89-92 (2008).
- Isacson, O. Ole Isacson: Development of New Therapies for Parkinson’s Disease. JoVE. 3, (2007).
