Summary

Geboren Normalisatie voor fluorescentie optische projectie Tomografie voor Whole Heart Imaging

Published: June 02, 2009
doi:

Summary

Wij stellen voor een genormaliseerd Geboren aanpak voor optische projectie Tomografie (BnOPT) die goed is voor de absorptie-eigenschappen van beeld gebracht monsters te verkrijgen accurate en kwantitatieve fluorescentie tomografische reconstructies. We maken gebruik van de voorgestelde algoritme om de fluorescentie moleculaire sonde distributie binnen kleine dierlijke organen te reconstrueren.

Abstract

Optische projectie tomografie is een drie-dimensionale beeldvormende techniek die is onlangs geïntroduceerd als een imaging tool in de eerste plaats in de ontwikkelingsbiologie en gen-expressie studies. De techniek maakt biologische monster optisch transparant door eerst drogen en ze vervolgens te plaatsen in een mengsel van benzylalcohol en benzylbenzoaat in een 2:1 verhouding (Babb of Murray s Heldere oplossing). De techniek maakt biologische monsters optisch transparant door eerst drogen ze in ethanolreeks oplossingen dan ze te plaatsen in een mengsel van benzylalcohol en benzylbenzoaat in een 2:1 verhouding (Babb of Heldere oplossing Murray s) te wissen. Na het clearing proces van de verstrooiing bijdrage in het monster kan sterk worden verminderd en maakte bijna te verwaarlozen, terwijl de absorptie bijdrage kan niet volledig worden geëlimineerd. Als u probeert om de fluorescentie verdeling binnen de steekproef te reconstrueren in onderzoek, deze bijdrage van invloed op de reconstructies en leidt, onvermijdelijk, om beeld artefacten en kwantificering fouten .. Terwijl de opname kan verder worden verminderd met een permanentie van weken of maanden in de open plek media, zal dit leiden tot een progressief verlies van fluorescentie en tot een onrealistisch lange monster verwerking tijd. Dit is het geval wanneer het reconstrueren zowel exogene contrastmiddelen (moleculaire contrastmiddelen) als endogene contrast (bijvoorbeeld reconstructies van genetisch uitgedrukt fluorescerende eiwitten).

Protocol

Imaging Procedure De experimentele opstelling wordt in detail weergegeven in figuur 1. Een lichtbron LS dient zowel als verlichting voor absorptie metingen en als excitatie bron voor fluorescentie metingen en het is gefilterd met een smalle band pass interference filter BPF. Een set van vaste en variabele grijsfilters ND in combinatie met de aanwezigheid van een automatische sluiter S laten de hoeveelheid licht op het monster te controleren en houden het laag genoeg om fotobleken te voorkomen….

Acknowledgements

C. Vinegoni erkent steun van de National Institutes of Health (NIH) subsidie ​​1-RO1-EB006432.

References

  1. Sharpe, J., Ahlgren, U., Perry, P., Hill, B., Ross, A., Hecksher-Sorensen, J., Baldock, R., Davidson, D. Optical projection tomography as a tool for 3D microscopy and gene expression studies. Science. 296, 541-544 (2002).
  2. Lee, K., Avondo, J., Morrison, H., Blot, L., Stark, M., Sharpe, J., Bangham, A., Coen, E. Visualizing plant development and gene in three dimensions using optical projection tomography. Plant Cell. 18, 2145-2156 (2006).
  3. Oldham, M., Sakhalkar, H., Wang, Y. M., Guo, P. Y., Oliver, T., Bentley, R., Vujaskovic, Z., Dewhirst, M. Three-dimensional imaging of whole rodent organs using optical computed and emission tomography. J. Biomed. Opt. 12, 1-10 (2007).
  4. Ntziachristos, V., Weissleder, R. Experimental three-dimensional fluorescence reconstruction of diffuse media by use of a normalized Born approximation. Opt. Lett. 26, 893-895 (2001).
check_url/kr/1389?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Vinegoni, C., Razansky, D., Figueiredo, J., Fexon, L., Pivovarov, M., Nahrendorf, M., Ntziachristos, V., Weissleder, R. Born Normalization for Fluorescence Optical Projection Tomography for Whole Heart Imaging. J. Vis. Exp. (28), e1389, doi:10.3791/1389 (2009).

View Video