Reinigung von Mitochondrien aus Hefezellen
Summary
Wir beschreiben eine schnelle und effektive Methode zur Aufreinigung von Mitochondrien aus der Hefe<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. Dieses Verfahren ermöglicht die High-Yield-Isolierung reiner Mitochondrien, die im Wesentlichen frei von Verunreinigungen durch andere Organellen sind und behalten ihre strukturelle und funktionelle Integrität nach ihrer Reinigung.
Abstract
Mitochondrien sind die Haupt-Website des ATP-Produktion im aeroben Stoffwechsel in eukaryotischen Zellen nicht-photosynthetischen<sup> 1</sup>. Diese komplexen Organellen spielen auch eine wesentliche Rolle im apoptotischen Zelltod<sup> 2</sup>, Das Überleben der Zelle<sup> 3</sup> Entwicklung von Säugetieren<sup> 4</sup>, Neuronale Entwicklung und Funktion<sup> 4</sup>, Intrazelluläre Signalwege<sup> 5</sup> Und Langlebigkeit Regulierung<sup> 6</sup>. Unser Verständnis dieser komplexen biologischen Prozesse durch Mitochondrien gesteuert setzt auf robuste Methoden zur Beurteilung ihrer Morphologie, ihrem Protein-und Lipid-Zusammensetzung, die Integrität ihrer DNA, und ihre zahlreichen lebenswichtigen Funktionen. Die Bierhefe<em> Saccharomyces cerevisiae</em>, Ist eine genetisch und biochemisch manipulierbar einzelligen Eukaryoten mit annotierten Genom-und Proteom-wohldefinierte, ein wertvolles Modell für die Erforschung der molekularen und zellulären Mechanismen, die die wesentlichen biologischen Funktionen der Mitochondrien. Für diese Arten von Studien, ist es entscheidend, hochreinen Mitochondrien haben. Hier präsentieren wir Ihnen eine detaillierte Beschreibung der eine schnelle und effektive Methode zur Reinigung von Hefe-Mitochondrien. Diese Methode ermöglicht die Isolierung von hochreinem Mitochondrien, die im Wesentlichen frei von Verunreinigungen durch andere Organellen sind und behalten ihre strukturelle und funktionelle Integrität nach ihrer Reinigung. Mitochondrien mit dieser Methode gereinigt werden für die zellfreie Rekonstitution wesentlicher mitochondriale Prozesse geeignet und können für die Analyse der mitochondrialen Struktur und Funktionen, mitochondriale Proteom-und lipidome und mitochondriale DNA verwendet werden.
Protocol
Discussion
Dieses Verfahren ermöglicht die High-Yield-Isolierung reiner Mitochondrien aus Hefezellen. Mitochondrien mit dieser Methode gereinigt sind im Wesentlichen frei von Verunreinigungen durch andere Organellen und behalten ihre strukturelle und funktionelle Integrität nach ihrer Reinigung. Die beschriebene Methode liefert Mitochondrien, die sich für zellfreie Rekonstitution wesentlicher mitochondriale Prozesse sind. Diese hochreinen Mitochondrien können auch für die Analyse der mitochondrialen Struktur und Funktionen, m…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus dem CIHR und der NSERC of Canada unterstützt. VIT ist ein CIHR New Investigator und Concordia University Research Chair in Genomics, Cell Biology and Aging.
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