Marquage fluorescent Drosophile Coeur
Summary
Nous décrivons ici un protocole de base pour le marquage fluorescent des différents éléments de tubes coeur de la larve et l'adulte<em> Drosophila melanogaster</em>. Ces spécimens sont bien adaptés pour l'imagerie par microscopie fluorescente ou confocale. Cette technique permet une analyse détaillée des caractéristiques structurelles des cœurs d'un organisme modèle puissant.
Abstract
L'<em> Drosophila melanogaster</em> Vaisseau dorsal, ou du coeur, est une structure tubulaire composé d'une seule couche de cardiomyocytes contractiles, cellules péricardiques qui s'alignent le long de chaque côté de la paroi cardiaque, les muscles de soutien et Alary, chez les adultes, une couche de cellules musculaires longitudinales ventrales. La maison contractiles des fibres conservé constituants de la cytoarchitecture musculaires y compris les faisceaux denses et complexes des myofibrilles protéine du cytosquelette / submembranous, qui interagissent avec les composantes homologues de la matrice extracellulaire. Nous décrivons ici un protocole pour la fixation et le marquage fluorescent des éléments particuliers du myocarde du cœur des larves disséquées et semi-intactes pour adultes<em> Drosophile</em>. Plus précisément, nous démontrons l'étiquetage des sarcomériques F-actine et d'α-actinine dans les coeurs des larves. De plus, nous effectuons l'étiquetage des F-actine et α-actinine dans myosine-GFP exprimer mouches adultes et d'α-actinine et pericardin, un collagène de type IV de la matrice extracellulaire, dans les cœurs sauvages adulte type. Une attention particulière est accordée à une stratégie de fixation pour les adultes semi-coeurs intacts qui minimise la manipulation et optimise la possibilité de maintenir l'intégrité des tubes cardiaques et les tissus associés. Ces préparations sont adaptés à l'imagerie par microscopie fluorescente et confocale. Globalement, cette procédure permet une analyse attentive et détaillée des caractéristiques structurelles du coeur d'un puissant système de modèle génétiquement maniable.
Protocol
Discussion
Nous présentons ici un protocole utile pour la préparation et la coloration du navire Drosophila melanogaster dorsale et des tissus attenants à l'imagerie par microscopie fluorescente ou confocale. Nous fournissons un compte rendu concis des étapes affiné par et couramment employées dans notre laboratoire pour la coloration efficace qui permet de bien résolu à l'imagerie in situ de la larve et adulte tubes cardiaques chez la drosophile. D'autres ont décrit des méthodes si…
Acknowledgements
Les auteurs remercient SI Bernstein (San Diego State University) pour une lecture critique et des suggestions utiles concernant la préparation de ce manuscrit. Ce travail a été soutenu par des subventions du NIH pour SI Bernstein, SDSU, et à R. Bodmer, BIMR, et par une bourse post-doctorale de l'affiliation Ouest des États de l'American Heart Association à G. Vogler et à A. Cammarato.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N’,N’-tetra-acetic acid (EGTA) | Reagent | Sigma-Aldrich® | E4378 | |
| Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure | Reagent | Polysciences Inc. | 50-00-0 | |
| Triton-X-100 | Reagent | Sigma-Aldrich® | 9002-93-1 | |
| Alexa Fluor® 594 phalloidin | Reagent | Invitrogen™ | A12381 | |
| Vectashield® Mounting Medium for Fluorescence with DAPI | Reagent | Vector Laboratories, Inc. | H-1200 | |
| Tungsten pins | Reagent | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Pin holder | Reagent | Fine Science Tools | 26018-17 |
References
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