여기 우리는 유충과 성인에서 심장 튜브의 다양한 요소의 형광 라벨을위한 기본 프로토콜을 설명 Drosophila melanogaster. 이러한 표본은 형광등이나 공촛점 현미경을 통해 이미지에 적합합니다. 이 기술은 강력한 모델 유기체에서 마음의 기능의 세부 구조 분석을 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
프로토콜
당신이 시작하기 전에
- 다음과 같은 솔루션을 준비 :
- 편안한 버퍼 (10 MM EGTA을 포함 인공 Drosophila hemolymph (ADH) ( "Drosophila에서 뛰는 심장을 떠올리"참조))
- 정착액 (1X PBS 4 %의 포름 알데히드)
- PBSTx (PBS는 0.1 % 트리톤 - X - 100을 포함)
- PBSTx에 적절하게 희석 주와 종 특정 찬란 분류 이차 항체
- 다음과 같은 심장병 튜브 (성인 파리 및 / 또는 애벌레의) 노출 Drosophila를 해부하다
- 반 그대로 Drosophila의 심장 준비 "Drosophila에서 뛰는 심장을 떠올리"에서 프로토콜, 또는
- 다음과 같은 수정 Drosophila 애벌레 NMJ 해부 프로토콜 1 : 사용 애벌레 해부 동안 ADH를 산소와 복부 정중선에서 약간 뒷부분 핀을 치환. 유충은 복부 정중선을 따라 절단됩니다. 전에 고정....
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토론
여기서 우리는 Drosophila melanogaster의 지느러미 선박 및 형광 또는 공촛점 현미경을 통해 이미지를위한 관련 조직을 준비하고 얼룩을위한 유용한 프로토콜을 제시한다. 우리도 세련되고 일반적으로 애벌레와 어른 Drosophila의 심장 튜브의 현장 이미지에 잘 해결을 허용 효과적으로 얼룩을 위해 우리가 실험실에서 고용 단계 간결한 계정을 제공합니다. 기타 약식 형태로 2, 3, 4에서와 비슷한 방법을 설명합니다.
얼룩 절차를 구현할 때 중요 자세한 내용은 배려를 필요로합니다. 예를 들어, 다른 생물 학적 재료로 발견, 공정 준수 Drosophila 심장 근육 섬유는 매우 취성 다음과 같은 고정된다. 특히 주 5 상당히 섬세하고있는 심장병 튜브에 연결된 지원 alary 섬유, 6, 7의 여러 쌍 있습니다. 따라서, 불필요한 조작을 제한하는 것.......
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감사의 글
저자는이 원고의 준비에 관한 중요 읽고 도움이 제안 SI 번스타인 (샌디에고 주립 대학)을 주셔서 감사합니다. 이 작품은 SI 번스타인, SDSU,와 R. Bodmer, BIMR에 NIH 교부금에 의해 지원되었다;와 미국 심장 협회의 미국 서부 제휴에서 G. 포글러와 A. Cammarato에 박사후 교제로.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N’,N’-tetra-acetic acid (EGTA) | 시약 | Sigma-Aldrich | E4378 | |
| 포름알데히드, 10%, 메탄올 프리, Ultra Pure | 시약 | Polysciences, Inc. | 50-00-0 | |
| Triton-X-100 | 시약 | Sigma-Aldrich | 9002-93-1 | |
| Alexa Fluor® 594 phalloidin | 시약 | Invitrogen | A12381 | |
| DAPI 포함 형광용 Vectashield® 마운팅 미디엄 | 시약 | Vector Laboratories | H-1200 | |
| 텅스텐 핀 | 시약 | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| 핀 홀더 | 시약 | Fine Science Tools | 26018-17 |
참고문헌
- Brent, J. R., Werner, K. M., McCabe, B. D. Drosophila larval NMJ dissection. J Vis Exp. , (2009).
- Molina, M. R., Cripps, R. M. Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells. Mech Dev. 1, 51-59 (2001).
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재인쇄 및 허가
