Summary
Técnica necessária para visualizar o coração batendo em larvas e adultos<em> Drosophila</em> São apresentados. Cada fase da vida exige uma metodologia diferente.
Abstract
O<em> Drosophila</emCardíaca> surgiu recentemente como um sistema bom modelo para examinar os mecanismos genéticos, celulares e moleculares subjacentes à função em corações miogênica. Um passo fundamental na análise da função cardíaca na mosca é encontrar uma maneira de acessar o coração de uma forma que preserva a sua função miogênica enquanto ainda permitindo que o órgão coração batendo a serem observados e registrados. Dois métodos diferentes para observar e registrar o coração batendo em ambos larva e adulto<em> Drosophila</em> São descritos aqui. Nossa preparação semi-intactas usando moscas adultas permite a visualização clara do coração abdominal, sem interferência da cutícula pigmentadas e sobrejacente corpos gordos. Para gravar coração bate larval é necessário imobilizar a larva, o que minimiza os movimentos do corpo, reduzindo assim os movimentos da parede do coração que não estão associados com as contrações do miocárdio. Nossas metodologias produzir adulto estável e preparações de coração larval que pode bater por horas a taxas de Hz 1-3.
Protocol
Discussion
O modelo de Drosophila provou ser uma poderosa ferramenta genética que tem sido utilizado para tratar uma variedade de questões científicas que vão desde desenvolvimento embrionário para a aprendizagem e memória. Recentemente, este organismo modelo versátil, tem sido usado para investigar a genética da função cardíaca na mosca. Uma série de tentativas para quantificar a fisiologia do coração em adultos Drosophila têm contado com observações feitas em moscas intacta através da cutícula abdominal. A mai…
Acknowledgements
KO é apoiado por uma bolsa da American Heart Association.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micro Dissecting Spring Scissors (curved) | Roboz | RS-5611 | Good for gross cuts (Step 3) | |
| Micro Dissecting Spring Scissors (straight) | Roboz | RS-5620 | ||
| Dumont #55 forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | ||
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11295-10 | ||
| Glass Capillaries, 100ul | VWR | 53432-921 | ||
| Glass Capillaries, fine | Science Products | GB100T8P | ||
| Pipette Puller | Sutter Equipment | P-97 | Both horizontal and vertical pipette pullers will work | |
| Plastic tubing | Tygon R-3603 | 1/16” inner diameter | for 100μl capillaries | |
| Plastic tubing | Tygon R-3603 | 1/32” inner diameter | for small capillaries | |
| Histoacryl® tissue adhesive | B.Braun, Melsungen |
References
- Ocorr, K., Reeves, N., Wessells, R. J., Fink, M., Chen, H. -. S. V., Akasaka, T., Yasuda, S., Metzger, J., Giles, W., Posakony, J. W., Bodmer, R. KCNQ potassium channel mutations cause cardiac arrhythmias in Drosophila that mimic the effects of aging. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 3943-3948 (2007).
- Broadie, K. S., Bate, M. Development of the embryonic neuromuscular synapse of Drosophila melanogaster. J Neurosci. 13, 144-166 (1993).
