האנדותל להרכיב המושבה ובתאים (ECFCs) הם כלי מבטיח ללמוד הומאוסטזיס לתקן כלי הדם.<sup> 1,2</sup> נייר זה מציג רומן בעלי חיים בסרום בשיטת תשלום עבור בידוד והרחבת ECFC מן הדם ההיקפיים אדם מבוגר heparinised עם lysate ונקווה טסיות הדם האנושי (pHPL) פוחת הסיכון של חיסון נגד שור.
Abstract
נייר זה מציג אסטרטגיית התאוששות הרומן אנדותל להרכיב המושבה ובתאים (ECFCs) מ heparinized אבל unmanipulated אחרת מבוגר דם היקפיים אדם בתוך ממוצע של 12 ימים. לאחר התרחבות בקנה מידה גדול> 1×10 8 ECFCs ניתן להשיג עבור בדיקות נוספות. ביתרון באמצעות pHPL הקשר של תאים אנושיים עם אנטיגנים בסרום שור ניתן לשלול. עד cytometry זרימה אימונוהיסטוכימיה התאים מבודדים ניתן לאפיין ECFC ואת הפונקציונליות שלהם חוץ גופית כדי ליצור מבנים דמויי כלי דם ניתן לבדוק assay matrigel. יתר על תאים אלה ניתן להזריק תת עורי במודל של עכברים כדי ליצור תפקודית, כלי perfused in vivo. לאחר התרחבות לטווח ארוך התפשטות cryopreservation, פונקציה ויציבות גנומית להופיע להישמר. 3,4
זה בידוד בעלי חיים חלבון חופשית שיטת הרחבה ישים בקלות לייצר כמות גדולה של ECFCs.
Protocol
א) ECFC ISOLATON יום 1: לפני שתתחיל בניסוי להכין את תרבית תאים בינוני צמיחה האנדותל בינוני-2 (EGM-2). מוסף 500ml האנדותל בסל בינוני 2 עם הפרין (1ml של 1000 U / ml), פתרון 100x 5 מ"ל של פניצילין / סטרפטומיצי?…
Discussion
זה בידוד הרומן שיטת ההרחבה הוא תהליך פשוט ויעיל כי הוא יעיל יותר, לצרוך פחות זמן על ידי הימנעות מכל הפרדת תאים (ללא שיפוע צפיפות הצורך) ופחות יקר מאשר טכניקות קונבנציונאלי. באמצעות מגע pHPL לאנטיגנים שור ו xenoimmunization הבאים המשוערת היא מחוץ לתחום. בתקופת התרבות קרישי קטן י?…
Acknowledgements
המחברים מודים לד"ר קתרינה Schallmoser למתן pHPL ו מרגרטה Frühwirth ודניאלה טלר לקבלת סיוע טכני מעולה.
Hofmann, N. A., Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells. J. Vis. Exp. (32), e1524, doi:10.3791/1524 (2009).