Endoteliales que forman colonias células progenitoras (ECFCs) son una herramienta prometedora para estudiar la homeostasis vascular y la reparación.<sup> 1,2</sup> Este artículo presenta un novedoso método de suero de origen animal libres para el aislamiento y la expansión de ECFC de heparina para adultos de sangre periférica humana con agregados de lisado de plaquetas humanas (pHPL) disminuyendo el riesgo de la vacunación anti-bovina.
Abstract
Este documento presenta una estrategia de recuperación de la novela de las células endoteliales progenitoras que forman colonias (ECFCs) de heparina pero por lo demás no manipulado adultos sangre periférica humana dentro de una media de 12 días. Después de la expansión a gran escala> 1×10 8 ECFCs se puede obtener por otras pruebas. Ventajosamente con pHPL el contacto de las células humanas con suero bovino antígenos pueden ser excluidos. Por citometría de flujo e inmunohistoquímica las células aisladas pueden ser caracterizados como ECFC y su funcionalidad in vitro para formar las estructuras vasculares, como puede ser probado en un ensayo de matrigel. Además, estas células pueden ser inyectada por vía subcutánea en un modelo de ratón para la formación de vasos funcionales, perfundidos in vivo. Después de la expansión a largo plazo y la proliferación de criopreservación, la función y la estabilidad genómica parece ser preservado 3,4.
Este aislamiento de proteína animal libre y el método de expansión es de fácil aplicación para generar una gran cantidad de ECFCs.
Protocol
A.) ECFC ISOLATON DIA 1: Antes de comenzar con el experimento de preparar el cultivo de células endoteliales de crecimiento medio mediano-2 (EGM-2). Suplemento de 500 ml de medio base endotelial-2 con heparina (1 ml de 1000 U / ml), solución de 5 ml 100x de penicilina / estreptomicina (todos Sigma, St. Louis, MO; www.sigmaaldrich.com ), L-glutamina (2 mM concentración final de ), y 50 ml de lisado de plaquetas humanas agrupados (pHPL). A …
Discussion
Este aislamiento novela y el método de expansión es un proceso sencillo y eficiente que es más eficiente y menos tiempo, evitando la separación de células (no hay gradiente de densidad es necesario) y menos costoso que las técnicas convencionales. Mediante el uso de contacto pHPL a los antígenos de la especie bovina y xenoimmunization siguientes supuestos se excluye. Durante el período de cultivo pequeños coágulos se pueden formar, causada por la pHPL. Basándonos en nuestra experiencia estos coágulos no afec…
Acknowledgements
Los autores agradecen a la Dra. Katharina Schallmoser para proporcionar pHPL y Frühwirth Margaretha y Thaler Daniela por su excelente asistencia técnica.
Hofmann, N. A., Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells. J. Vis. Exp. (32), e1524, doi:10.3791/1524 (2009).