בידוד בעלי חיים הרחבת חינם סרום של טבורי האדם נגזר תאים סטרומה mesenchymal (MSCs) ו האנדותל יצירת המושבה ובתאים (ECFCs)
Summary
פרוטוקול זה מתאר את הבידוד והרחבת הבאות של תאים סטרומה mesenchymal ותאי האנדותל המושבה להרכיב ללא שימוש בבעלי חיים בסרום ליצור זוגות עצמיים למטרות השתלה ניסיונית.
Abstract
חבל הטבור הוא מקור עשיר עבור ובתאים עם פוטנציאל שגשוג גבוהה כולל תאים סטרומה mesenchymal (שמכונה גם בתאי גזע mesenchymal, MSCs) ו אנדותל להרכיב המושבה ובתאים (ECFCs). שני סוגי תאים הם שחקני מפתח בשמירה על שלמות רקמות הם כנראה מעורבים גם בתהליכי ההתחדשות היווצרות הגידול.
כדי ללמוד ביולוגיה שלהם לתפקד באופן השוואתי חשוב יש גם סוגי תאים זמין מתורם זהה. זה יכול להיות גם מועיל למטרות משובי להפיק MSCs ו ECFCs מרקמות זהה.
מאחר ותרופות הסלולר צריך בסופו של דבר מוצאים את דרכם מהספסל אל המיטה הקמנו שיטה חדשה לבודד להרחיב עוד יותר ובתאים ללא שימוש של חלבון מן החי. משולב lysate טסיות האנושי (pHPL) החליף בסרום שור העובר בכל השלבים של פרוטוקול שלנו לחלוטין להימנע ממגע של תאים וחלבונים xenogeneic.
וידאו זה מדגים מתודולוגיה בידוד והרחבת ובתאים מחוט one הטבור.
כל החומרים והנהלים יתוארו.
Protocol
Discussion
יש מגוון של מקורות שמהם לקבל MSCs או ECFCs כולל מח העצם, רקמת שומן, דם טבורי, וכו '
זה הכרחי כדי לקבל את שני הסוגים של אבות מאותו מקור כדי להשוות ישירות את מעורבותם של תאים מסוגים שונים בתהליכי התחדשות רקמות כמו כלי או תרומה התקדמות הג?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מודים קתרינה Schallmoser למתן pHPL, אווה רודה וניקול הופמן להערות שימושי היד, דניאלה טלר לבין מרגרטה Fr hwirth לקבלת סיוע טכני, מוניקה פארל לעריכה לשונית, אווה לנג, מרגיט הולצפפל וסנדרה Eppich על החוג למיילדות למתן את מיתרי.
עבודה זו נתמכה על ידי קרן המחקר האוסטרי (FWF, מענק N211-NAN ל DS), המחקר האוסטרי קידום הסוכנות (FFG, מענק N200 ל DS) ועל ידי תא גזע בוגרים Research Foundation (ע"ר). AR הוא עמית לרפואה של התוכנית PhD מולקולרית של האוניברסיטה לרפואה של גראץ.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| alpha modified MEM | Sigma | |||
| L-GLutamin | Sigma | |||
| Penicillin/Streptomycin | Sigma | |||
| EBM | Lonza | |||
| Single cytokine quots | Lonza | |||
| 75 cm2 flasks | Corning | |||
| 150 cm2 plates | Corning | |||
| Cell scraper | Corning | |||
| Trypsin/EDTA | Sigma | |||
| Monoclonal antibodies | Becton Dickenson | |||
| PBS | ||||
| 50 ml tubes | Falcon | |||
| 500 mL filter 20 μm pore size |
Millipore | |||
| Preservative free heparin | Biochrom |
References
- Schallmoser, K. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).
- Reinisch, A. Humanized system to propagate cord blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells for clinical application. Regen Med. 2, 371-382 (2007).
- Reinisch, A. Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo. Blood. 113, 6716-6725 (2009).
- Strunk, D. Phenotypic characterization and preclinical production of human lineage-negative cells for regenerative stem cell therapy. Transfusion. 45, 315-326 (2005).
