Montering av en nearfield infraröd mikroskop för avbildning protein aggregat beskrivs.
Abstract
Detta dokument syftar till att instruera läsaren i montering och drift av en infraröd närområdet mikroskop för avbildning bortom diffraktionsgränsen. Den apertureless närområdet mikroskop är en ljusspridning typ instrument som ger infraröda spektra på ca 20 nm upplösning. En fullständig lista över komponenter och en steg-för-steg-protokoll för användningen. Vanliga fel i montering och instrument tuning diskuteras. En representant datauppsättning som visar den sekundära strukturen av en amyloid ROTHÅR presenteras.
Protocol
Bakgrund: Apertureless sond närområdet IR-mikroskopi ger hög rumslig upplösning. Det är en relativt ny teknik där en incident infraröd stråle är utspridd av en skarp atomkraftsmikroskopi (AFM) spets oscillerande vid resonansfrekvens av fribärande nära provet. En IR-detektor samlar spritt ljus och är demodulerade vid denna resonansfrekvens eller dess övertoner. På detta sätt kan bakgrunden skingra den fokuserade laserstrålen incident på resten av provets yta minskas och en rums…
Akhremitchev, B. B., Sun, Y., Stebounova, L., Walker, G. C. .Monolayer-Sensitive Infrared Imaging of DNA Stripes Using Apertureless Near-Field Microscopy.Langmuir. 18, 5325-5328 (2002).
Paulite, M., Fakhraai, Z., Akhremitchev, B. B., Mueller, K., Walker, G. C. Assembly, Tuning and Use of an Apertureless Near Field Infrared Microscope for Protein Imaging. J. Vis. Exp. (33), e1581, doi:10.3791/1581 (2009).