Summary

Transplantatie van Whole nier Marrow in Adult zebravis

Published: February 25, 2007
doi:

Summary

Abstract

Hematopoietische stamcellen (HSC) zijn een zeldzame populatie van pluripotente cellen die al het bloed gedifferentieerde lijnen gedurende de gehele levensduur van een organisme te handhaven. De functionele definitie van een HSC is een getransplanteerd cel die het vermogen om te herstellen al het bloed lineages van een bestraald ontvanger op lange termijn heeft. Deze benaming is opgericht door tientallen jaren van baanbrekende werk in zoogdieren systemen. Met behulp van hematopoietische stamceltransplantatie (HCT) en omgekeerde genetische manipulaties in de muis, zijn de onderliggende regelgeving factoren van HSC biologie begint te worden onthuld, maar zijn nog steeds grotendeels onder-onderzocht. Onlangs heeft de zebravis ontpopt als een krachtig genetisch model om gewervelde hematopoiesis studeren. Tot vaststelling van HCT in de zebravis zal kunnen wetenschappers de grootschalige genetische en chemische screening methodologieën beschikbaar in zebravis om nieuwe mechanismen die ten grondslag liggen aan HSC regelgeving onthullen gebruiken. In dit artikel tonen we een methode om HCT uit te voeren bij volwassen zebravissen. We tonen de dissectie en voorbereiding van de zebravis hele nier merg, de site van de volwassen hematopoiese in de zebravis en de introductie van deze donor cellen in de circulatie van bestraalde ontvanger vis via intracardiale injectie. Daarnaast beschrijven we de post-transplantatie zorg van de vis in een "ICU" om hun gezondheid op lange termijn te verhogen. In het algemeen, zachte verzorging van de vissen voor, tijdens en na de transplantatie is cruciaal voor het aantal vissen dat meer dan een maand na de procedure, die essentieel is voor de beoordeling van de lange termijn (<3 maanden), innesteling zal overleven toenemen. De experimentele gegevens die worden gebruikt om dit protocol te stellen, zal elders worden gepubliceerd. De oprichting van dit protocol zal zorgen voor de fusie van grootschalige zebravis genetica en biologie transplantatie.

Protocol

Bestraling Bestralen WT vis op 25Gy 2 dagen voor de transplantatie Nier dissectie Offer gewenste aantal TL-donoren in tricaïne (~ 100 ml 4mg/ml tricaïne / liter water van de vis) (gemiddelde van 500.000 cellen per donor vis) Isoleer nier in 0.9x PBS + 5% FCS + 1% Penn STREP ("PBS +") in tube Breuk met 1 ml pipet, daarna met 10 ml spuit met 18 1 / 2 G naald Overdracht naar 50ml conische en vul met PBS + Spin down @ …
check_url/kr/159?article_type=t

Play Video

Cite This Article
LeBlanc, J., Venezia Bowman, T., Zon, L. Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (2), e159, doi:10.3791/159 (2007).

View Video