6.5 DPC Fare Embriyolar diseksiyonu
Summary
Postimplantation-dönem embriyoların İzolasyon bir gen desenlendirme hücre soy karar verme süreçlerini embriyonik gelişim sırasında çalışma ve analiz etmek için izin verir, fakat erken embriyo uygun diseksiyonu zor olabilir. Bu protokol erken ilkel bir çizgi-dönem embriyoların izole etmek için bir yöntem açıklanır (~ 6.5 gün coitum [DPC).
Abstract
Memeli embriyonik gelişimin erken aşamalarında gen ekspresyonu analizi, gen fonksiyonu, hücre-hücre etkileşimi ve sinyal mekanizmaları bu kılavuzu embriyonik desenlendirme hakkında önemli ipuçları sağlayabilir. Ancak, fare embriyo implantasyonu kısa bir süre sonra desidua diseksiyonu zor bir işlem olabilir ve bu sürecin ayrıntılı adım-adım belgelerine eksiktir.
Burada ilk kez hamile bir fare rahim diseksiyon (vajinal fiş belirlenen gün 0.5 poist coitum tespit) ve daha sonra embriyonun anne desidua diseksiyon post-implantasyon (6.5 DPC) embriyolar nasıl izole edilir göstermektedir. Reichert membran diseksiyonu ectoplacental koni kaldırılması yanı sıra açıklanmıştır.
Protocol
Discussion
Fare Postimplantation 4,5 DPC ve doğum arasında oluşur. Bu diseksiyon yöntemi olarak tanımlanan, aslında, önceki veya sonraki 5,5-8,5 DPC sahne embriyolar izole etmek için uygulanabilir.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micro Dissecting Forceps serrated, straight | Tool | Roboz | RS-5130 | 2 pairs |
| Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX | Tool | Roboz | RS-5010 | 2 pairs |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1X) | Reagent | Invitrogen | 14190 | |
| Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish | Tool | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| 4% Paraformaldehyde in PBS | Reagent | |||
| Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors | Tool | Fisher Scientific | 08-940 | |
| Pregnant female mice | Animal | |||
| Dissecting Microscope | Microscope |
References
- Nagy, A., et al. . Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , (2003).
