Multi-פרמטרית Perifusion איילט מערכת בתוך התקן Perifusion Microfluidic
Summary
המכשיר microfluidic perifusion איון פותחה להערכת הפרשת אינסולין הדינמי של איים רבים דימות פלואורסצנטי סימולטני של זרם סידן שינויים אפשריים המיטוכונדריה.
Abstract
המכשיר microfluidic perifusion איון פותחה להערכת הפרשת אינסולין הדינמי של איים רבים דימות פלואורסצנטי סימולטני של זרם סידן שינויים אפשריים המיטוכונדריה. המכשיר מורכב משלוש שכבות: השכבה הראשונה כוללת מערך של בארות microscale (500 מיקרומטר ו בקוטר 150 מיקרומטר עומק) המסייעים כדי לשתק את איים בעוד חשופים תזרים ולהגדיל את שטח הפנים חשוף של איים, את השכבה השנייה מכילה מעגלי perifusion קאמרית (3 מ"מ עמוקה, בקוטר 7 מ"מ); ואת השכבה השלישית מכילה ערוץ מפרצון-ערבוב כי האוהדים לפני הזרקה לתוך תא perifusion (2 מ"מ רוחב, 19 מ"מ אורך, 500 מיקרומטר גובה) לייעול את היעילות ערבוב לפני הכניסה לתא perifusion. יצירה של גלוקוז הדרגתיים שונים, כולל צורה ליניארית פעמון, צורות מרובע גם ניתן ליצור רשת perifusion microfluidic והוא הוכיח.
Protocol
Discussion
מסורתית perifusion איון מערכות (macroscale ו microscale) יש מגבלות כולל המורכב של הגדרת העיצוב, דרישות טכניות גבוהות, קושי ליצור למשתמש שנקבעו הדרגתיים כימיים במערכת. מערכת perifusion microfluidic המתואר כאן מתגבר על המגבלות האלה עם גיאומטריה פשוטה של עיצוב ייצור. חשוב מכך, מערכת זו יכולה ל…
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי AAUW הבינלאומי המילגה כדי Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) על חוזה Oberholzer, והפרויקט סוכרת שיקגו.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 60ml Syringes | BD | |||
| Fura-2 fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Rhodamine123 Fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Glucose | Sigma | |||
| Bovine Serum Albumin | Sigma | |||
| 30″ Silicone tubings | Cole Palmer | 1/16 x 1/8in | ||
| 1.5ml Eppendorf tubes | Fisher | |||
| Y-connectors | Cole Palmer | 1/16” & 4mm | ||
| Syringe connectors | Cole Palmer | female luer plug 1/16” | ||
| Straight connectors | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Elbow connector | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Havard syringe pump | Harvard Apparatus | |||
| Perifusion device | ||||
| Hot plate | PMC | |||
| Thermometer | Omega Engineering Inc. | |||
| Fraction collector | Gibson | |||
| Pippettor | Fisher | |||
| Inverted epiflorescence microscope | Olympus | IX71 | ||
| Charge-coupled device | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
References
- Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets. Lab Chip. 9, 97-106 (2009).
