Microfluidic Perifusion डिवाइस के भीतर एक मल्टी पैरामीट्रिक आइलेट Perifusion सिस्टम
Summary
एक microfluidic आइलेट perifusion डिवाइस कई islets और कैल्शियम बाढ़ और mitochondrial संभावित परिवर्तनों के साथ – साथ प्रतिदीप्ति इमेजिंग के गतिशील इंसुलिन स्राव के मूल्यांकन के लिए विकसित किया गया था.
Abstract
एक microfluidic आइलेट perifusion डिवाइस कई islets और कैल्शियम बाढ़ और mitochondrial संभावित परिवर्तनों के साथ – साथ प्रतिदीप्ति इमेजिंग के गतिशील इंसुलिन स्राव के मूल्यांकन के लिए विकसित किया गया था. डिवाइस तीन परतों के होते हैं: पहली परत microscale (500 सुक्ष्ममापी व्यास और 150 सुक्ष्ममापी गहराई) कुओं कि islets स्थिर जबकि प्रवाह और islets के उजागर सतह क्षेत्र को अधिकतम करने के लिए उजागर करने में मदद की एक सरणी शामिल हैं, दूसरी परत एक परिपत्र शामिल perifusion कक्ष (3 गहरी मिमी, 7 मिमी व्यास), और तीसरी परत एक इनलेट चैनल मिश्रण होता है कि प्रशंसकों के बाहर पहले perifusion चेंबर में अनुकूलन के लिए इंजेक्शन (चौड़ाई में 2 मिमी, लंबाई में 19 मिमी, और ऊंचाई में 500 सुक्ष्ममापी) मिश्रण दक्षता से पहले perifusion कक्ष में प्रवेश करने के लिए. एक रेखीय, घंटी आकार सहित विभिन्न ग्लूकोज gradients, और वर्ग आकार के निर्माण microfluidic perifusion नेटवर्क में भी बनाया जा सकता है और प्रदर्शन.
Protocol
Discussion
पारंपरिक आइलेट perifusion सिस्टम (macroscale और microscale) सेटअप और डिजाइन, उच्च तकनीकी आवश्यकताओं, और प्रणाली में उपयोगकर्ता निर्धारित रासायनिक gradients बनाने की कठिनाई के परिसर सहित कुछ सीमाएँ है. microfluidic perifusion यहाँ वर्णित प्रण…
Acknowledgements
इस काम Adeola Adewola, NIH / (U42RR023245) NCRR जोस Oberholzer, और शिकागो मधुमेह परियोजना AAUW अंतरराष्ट्रीय फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 60ml Syringes | BD | |||
| Fura-2 fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Rhodamine123 Fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Glucose | Sigma | |||
| Bovine Serum Albumin | Sigma | |||
| 30″ Silicone tubings | Cole Palmer | 1/16 x 1/8in | ||
| 1.5ml Eppendorf tubes | Fisher | |||
| Y-connectors | Cole Palmer | 1/16” & 4mm | ||
| Syringe connectors | Cole Palmer | female luer plug 1/16” | ||
| Straight connectors | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Elbow connector | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Havard syringe pump | Harvard Apparatus | |||
| Perifusion device | ||||
| Hot plate | PMC | |||
| Thermometer | Omega Engineering Inc. | |||
| Fraction collector | Gibson | |||
| Pippettor | Fisher | |||
| Inverted epiflorescence microscope | Olympus | IX71 | ||
| Charge-coupled device | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
References
- Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets. Lab Chip. 9, 97-106 (2009).
