Un multi-parametrica Perifusion Sistema isolotto all'interno di un dispositivo Perifusion Microfluidic
Summary
Un dispositivo microfluidic perifusion isolotto è stato sviluppato per la valutazione della secrezione insulinica dinamica di isole multiple e simultanee imaging di fluorescenza di afflusso di calcio e mitocondriale potenziali cambiamenti.
Abstract
Un dispositivo microfluidic perifusion isolotto è stato sviluppato per la valutazione della secrezione insulinica dinamica di isole multiple e simultanee imaging di fluorescenza di afflusso di calcio e mitocondriale potenziali cambiamenti. Il dispositivo è costituito da tre strati: primo strato contiene un array di microscala pozzi (500 micron di diametro e 150 micron di profondità) che aiutano a immobilizzare le isolette, mentre esposto al flusso e massimizzare la superficie esposta delle isole, il secondo strato contiene una circolare perifusion camera (3 mm di profondità, 7 mm di diametro) e il terzo strato contiene un ingresso di miscelazione dei canali che i fan prima dell'iniezione nella camera perifusion (2 mm in larghezza, 19 mm di lunghezza e 500 micron di altezza) per l'ottimizzazione l'efficienza di miscelazione prima di entrare nella camera di perifusion. La creazione di gradienti di glucosio diverse tra cui una lineare, forma a campana, e forme squadrate può anche essere creato nella rete perifusion microfluidica ed è dimostrato.
Protocol
Discussion
I sistemi tradizionali di perifusion isolotto (macroscala e microscala) hanno alcune limitazioni tra cui complesso di configurazione e design, elevate esigenze tecniche, e la difficoltà di creare utenti prescritto gradienti chimici nel sistema. Il sistema perifusion microfluidica descritto qui di superare queste limitazioni con geometria semplice di progettazione e fabbricazione. Più importante, questo sistema può essere integrato con l'approccio di imaging a fluorescenza che forniscono come uno strumento unico p…
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto da AAUW internazionale borsa di studio per Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) a Jose Oberholzer, e il Progetto Diabete Chicago.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 60ml Syringes | BD | |||
| Fura-2 fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Rhodamine123 Fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Glucose | Sigma | |||
| Bovine Serum Albumin | Sigma | |||
| 30″ Silicone tubings | Cole Palmer | 1/16 x 1/8in | ||
| 1.5ml Eppendorf tubes | Fisher | |||
| Y-connectors | Cole Palmer | 1/16” & 4mm | ||
| Syringe connectors | Cole Palmer | female luer plug 1/16” | ||
| Straight connectors | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Elbow connector | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Havard syringe pump | Harvard Apparatus | |||
| Perifusion device | ||||
| Hot plate | PMC | |||
| Thermometer | Omega Engineering Inc. | |||
| Fraction collector | Gibson | |||
| Pippettor | Fisher | |||
| Inverted epiflorescence microscope | Olympus | IX71 | ||
| Charge-coupled device | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
References
- Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets. Lab Chip. 9, 97-106 (2009).
