Modelagem Colite murino utilizando Dextran Sulfato de Sódio (DSS)
Summary
Dextran sulfato de sódio (DSS), administrada na água de beber é um modelo de lesão inflamatória estabelecida murino de colite aguda. Este protocolo descreve o método para o tratamento DSS ea preparação dos tecidos.
Abstract
Colite pode ocorrer por infecções virais ou bacterianas, insulto isquêmico, ou doenças auto-imunes; Colite Ulcerativa e mais notadamente a variante do cólon da doença de Crohn – Colite de Crohn. Colite aguda podem apresentar dor abdominal e distensão, má absorção, diarréia, hematoquezia e muco nas fezes. Estamos começando a entender as complexas interações entre o meio ambiente, genética e disfunção da barreira epitelial em modelos de doença inflamatória intestinal e animal de colite têm sido essenciais para fazer avançar a nossa compreensão da doença. Um modelo popular envolve completando a água potável de camundongos com sulfato de baixo peso molecular de sódio Dextran (DSS), resultando em danos epiteliais e uma resposta robusta inflamatória no cólon de vários dias<sup> 1</sup>. Variações dessa abordagem pode ser usada para modelo de lesão aguda, lesão aguda seguida de reparo, e ciclos repetidos de DSS intercaladas com recuperação de modelagem doenças inflamatórias crônicas<sup> 2</sup>. Após um tratamento de quatro dias de DSS 3% em água potável, os camundongos mostram sinais de colite aguda, incluindo a perda de peso, sangue nas fezes e diarréia. Os ratos são sacrificados na conclusão do curso de tratamento e em dois pontos necropsia dissecados são processados e pode ser "enrolado suíço"<sup> 3</sup> Para permitir a análise microscópica de todo o cólon ou infundido com formol como "lingüiça" para permitir a análise macroscópica. Tecido é então embebidos em parafina, seccionados e corados para análise histológica.
Protocol
Discussion
Este protocolo pode ser modificado para modelo de lesão aguda, lesão de reparação, ou crônica processos de lesão do cólon.
Modificação lesão aguda:
DSS ad lib tratamento para 4-6 dias, seguido pelo sacrifício imediato
Lesão-Modificação:
Lesões com 4-6 dias de tratamento DSS seguido por período de recuperação de 3-4 dias e sacrifício (como descrito no protocolo acima).
…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Financiamento fornecido pelo NIH (1 K08 DK080221-01) e fundos de desenvolvimento institucional Vanderbilt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dextran Sulfate Sodium Salt | USB Corp | 9011-18-1 | mol wt 40,000-50,000 | |
| 10% Buffered Formalin Phosphate | Fisher Scientific | SF100-4 | ||
| Isoflurane, USP | Phoenix Pharmaceuticals | NDC 57319-474-06 | ||
| TISSUE PATH Macrosette Cassettes | Fisher Healthcare | 15182706 | ||
| BD 10 ml Syringe | B-D | 309604 | ||
| Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | E190 | Dilute to 70% with distilled water | |
| 20G Straight Feeding Needle | VWR | 20068-612 | ||
| 27G1/2 PrecisionGlide Needle | B-D | 305109 | ||
| Dissecting Scissors Sharp/Blunt Tip | VWR | 82027-588 | ||
| Waugh Forceps | VWR | 82027-428 | ||
| Non-absorbable Suture | LOOK Surgical Specialties | SP116 | ||
| Whatman Blotting Paper | VWR | 28298-020 | Cut as needed | |
| Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter | Cole-Parmer | EW-06731-2 | ||
| Carbon fiber composites digital caliper | Fisher Scientific | 15-007-958 |
References
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