Murina kolit modellering med hjälp av dextransulfat Natrium (DSS)
Summary
Dextransulfat natrium (DSS) administreras i dricksvatten är en etablerad mus-inflammatoriska skador modell av akut kolit. Detta protokoll föreslås en metod för DSS behandling och beredning av vävnader.
Abstract
Kolit kan uppstå från virus eller bakteriella infektioner, ischemisk förolämpning eller autoimmuna sjukdomar, främst ulcerös kolit och kolon variant av Crohns sjukdom – Crohns kolit. Akut kolit kan innebära med buksmärtor och dilatation, malabsorption, diarré, Hematochezia och slem i avföringen. Vi börjar förstå de komplexa sambanden mellan miljö, genetik och epitelceller barriär dysfunktion vid inflammatorisk tarmsjukdom och djurmodeller av kolit har varit väsentliga för att öka kunskaperna om denna sjukdom. En populär modell Komplettera dricksvatten av möss med låg molekylvikt Dextran natriumsulfat (DSS), vilket resulterar i epitelial skador och en robust inflammatorisk reaktion i tjocktarmen varar flera dagar<sup> 1</sup>. Varianter av denna metod kan användas för att modellera akut skada, akut skada följt av reparation, och upprepade cykler av DSS varvat med kronisk återhämtning modellering inflammationssjukdomar<sup> 2</sup>. Efter en fyra dagar lång behandling på 3% DSS i dricksvatten, möss visar tecken på akut kolit inklusive viktminskning, blodig avföring och diarré. Möss avlivas i slutet av behandlingen och vid obduktion dissekerade kolon behandlas och kan "schweiziska rullas"<sup> 3</sup> Att tillåta mikroskopisk analys av hela tjocktarmen eller infunderas med formalin som "korvar" att tillåta makroskopiska analys. Tissue är då inbäddad i paraffin, sektioneras och färgas för histologisk granskning.
Protocol
Discussion
Detta protokoll kan modifieras för att modellera akut skada, skada, reparation, eller kronisk kolon processer skada.
Akut skada Ändring:
DSS behandling ad lib i 4-6 dagar följt av omedelbar offer
Skador-Reparation Ändring:
Skada med 4-6 dagars DSS behandling följt av återhämtning under 3-4 dagar och offer (som beskrivs i ovannämnda protokoll).
Kronisk Kolit Ändring:
<p clas…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Finansiering från NIH (1 K08 DK080221-01) och Vanderbilt institutionella fonder utveckling.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dextran Sulfate Sodium Salt | USB Corp | 9011-18-1 | mol wt 40,000-50,000 | |
| 10% Buffered Formalin Phosphate | Fisher Scientific | SF100-4 | ||
| Isoflurane, USP | Phoenix Pharmaceuticals | NDC 57319-474-06 | ||
| TISSUE PATH Macrosette Cassettes | Fisher Healthcare | 15182706 | ||
| BD 10 ml Syringe | B-D | 309604 | ||
| Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | E190 | Dilute to 70% with distilled water | |
| 20G Straight Feeding Needle | VWR | 20068-612 | ||
| 27G1/2 PrecisionGlide Needle | B-D | 305109 | ||
| Dissecting Scissors Sharp/Blunt Tip | VWR | 82027-588 | ||
| Waugh Forceps | VWR | 82027-428 | ||
| Non-absorbable Suture | LOOK Surgical Specialties | SP116 | ||
| Whatman Blotting Paper | VWR | 28298-020 | Cut as needed | |
| Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter | Cole-Parmer | EW-06731-2 | ||
| Carbon fiber composites digital caliper | Fisher Scientific | 15-007-958 |
References
- Okayasu, I. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).
- Martinez, J. A. Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis. Gastroenterology. 131 (2), 579-588 (2006).
- Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. The “Swiss roll”: a simple technique for histological studies of the rodent intestine. Lab Anim. 15 (1), 57-59 (1981).
- Mahler, M. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).
- Aharoni, R. Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease. J Pharmacol Exp Ther. 318 (1), 68-78 (2006).
- Hahm, K. B. Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease. Gut. 49 (2), 190-198 (2001).
- Green, B. T. Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287 (6), G1238-1246 (2004).
- Dieleman, L. A. Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines. Clin Exp Immunol. 114 (3), 385-391 (1998).
