Enregistrements aspiration simple cellule à partir de cônes photorécepteurs de la souris
Summary
Nous allons montrer comment enregistrer les réponses flash à partir de cônes de souris en utilisant une électrode de succion.
Abstract
Photorécepteurs Rod et cônes dans la rétine sont responsables de la détection de lumière. Dans l'obscurité, des nucléotides cycliques-dépendants (CNG) des canaux dans le segment externe sont ouvertes et permettent aux flux de cations régulièrement vers l'intérieur à travers la membrane, dépolariser la cellule. Exposition à la lumière déclenche la fermeture des canaux CNG, bloque le flux cation courant entrant, et donc les résultats de l'hyperpolarisation cellulaire. Basé sur la polarité des photorécepteurs, une méthode d'enregistrement d'aspiration a été développé en 1970 que, contrairement à la classique technique de patch-clamp, ne nécessite pas de pénétrer la membrane plasmique<sup> 1</sup>. Dessin du segment externe dans une pipette en verre bien ajustés remplis de solution extracellulaire permet d'enregistrer les changements en cours dans des cellules individuelles lors de test-éclair d'exposition. Cependant, ce bien établi "extérieur-segment-in (OS-in)" enregistrement d'aspiration n'est pas adapté pour les enregistrements de cône de la souris, en raison de la faible pourcentage de cônes dans la rétine de souris (3%) et les difficultés à identifier le cône segments externes. Récemment, un segment interne-dans (IS-in) d'enregistrement de configuration a été développé pour tracer le segment intérieur / région nucléaire du photorécepteur dans la pipette d'enregistrement<sup> 2,3</sup>. Dans cette vidéo, nous allons montrer comment enregistrer à partir individuels photoresponses cône de souris à l'aide d'électrodes à aspiration simple cellule.
Protocol
Discussion
L'enregistrement d'aspiration mono-cellulaire de cellules photoréceptrices a été développé il ya 3 décennies. Il nous permet d'enregistrer le changement trans-membranaire courant induit par une stimulation lumineuse sans pénétrer la membrane cellulaire. En raison de haute adhérence cellule-cellule, il est difficile d'isoler saine seule tige et le cône de la rétine de souris, comme la rétine des amphibiens et il est difficile de trouver des cônes individuels en raison de la faible pourcentage…
Acknowledgements
Soutenu par le Prix de développement de carrière à partir de la recherche pour prévenir la cécité, NIH EY 019 312, et subvention sans restriction de la recherche pour prévenir la cécité et EY 02687 (Département d'ophtalmologie et de sciences visuelles à l'Université Washington).
References
- Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments. Nature. 269, 78-80 (1977).
- Nikonov, S. S. Photoreceptors of Nrl -/- mice coexpress functional S- and M-cone opsins having distinct inactivation mechanisms. J Gen Physiol. 125, 287-304 (2005).
- Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings. J Gen Physiol. 127, 359-374 (2006).
- Applebury, M. L. The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning. Neuron. 27, 513-523 (2000).
- Cornwall, M. C., Fein, A., MacNichol, E. F. Cellular mechanisms that underlie bleaching and background adaptation. J Gen Physiol. 96, 345-372 (1990).
- Calvert, P. D. Phototransduction in transgenic mice after targeted deletion of the rod transducin alpha -subunit. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 13913-13918 (2000).
