Hawaii Bobteylleri Squid Hemocytes Alınması Euprymna scolopes Ve Simbiyotik ve Non-Simbiyotik Bakteriler bağlılık Gözlem
Summary
Bu video, Hawaii kuyruğu kesik kalamar hemocytes (kan hücreleri) elde etmek için nasıl göstereceğiz<em> Euprymna scolopes</em> Hücre biyolojik ve bakteriyel adezyon tayinlerde kullanım için. Hemocytes floresan boya ile boyanmış ve GFP-etiketli bakterilere maruz kalacak.
Abstract
Bağışıklık sisteminin moleküler sinyal yararlı bakteri ve ev sahipleri arasında arabuluculuk rolü ile ilgili çalışmalar, son yıllarda, kendi Mikrobiyota ökaryotlarda eş-evrim anlayışımıza önemli katkılarda bulunmuşlardır. Hawaii kuyruğu kesik kalamar arasındaki simbiyotik ilişki,<em> Euprymna scolopes</em> Bioluminescent bakteri<em> Vibrio fischeri</em> Hayvan gelişimi üzerinde yararlı bakterilerin etkileri anlamak için bir model sistem olarak kullanılmıştır. Son çalışmalar, makrofaj gibi hemocytes, kalamar ev sahibinin doğuştan gelen bağışıklık sisteminin tek hücresel bileşeni, büyük olasılıkla, bu derneğin kurulması ve bakım arabuluculuk önemli bir rol oynadığını göstermiştir. Bu protokol gelen hemocytes elde etmek için nasıl göstereceğiz<em> E. scolopes</em> Ve daha sonra bakteriyel bağlayıcı tayinlerde bu hücreleri kullanır. Hemolimf ana sefalik kan damarı şırınga tarafından toplanan önce Yetişkin kalamar ilk anestezi. Ayıklanan hemolimf alan ev sahibi hemocytes, odacıklı cam lamelleri yapıştırılır ve daha sonra yeşil flüoresan protein etiketli simbiyotik maruz<em> Vibrio fischeri</em> Ve non-simbiyotik<em> Vibrio harveyi</em>. Hemocytes floresan boya ile zıt (Hücre Tracker Portakal, Invitrogen) ve ardından floresan mikroskopi kullanılarak görüntülendi.
Protocol
Discussion
Bağışıklık sisteminin moleküler sinyal yararlı bakteri ve ev sahipleri arasında arabuluculuk rolü ile ilgili çalışmalar, son yıllarda, kendi Mikrobiyota ökaryotlarda eş-evrim anlayışımıza önemli katkılarda bulunmuşlardır. Squid / vibrio sistemi, bu alanda 2,3,5,6,8 temel soruları yanıtlamak için bir uysal bir model sistem olarak kendini kanıtlamıştır. Kalamar Euprymna scolopes ışık organ ışık bakteri Vibrio fischeri tarafından özel olarak kolonizasyon iz…
Acknowledgements
Finansman Kaynakları: SVN, Connecticut Araştırma Vakfı ve Moleküler ve Hücre Biyolojisi Bölümü Üniversitesi, Sigma Xi Grant Yardım Araştırma ve Antonio H. ve Majorie R.
Romano Lisansüstü Eğitim Bursu AJC
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
| 26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
| SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
| SP2 Confocal Microscope | Leica |
References
- Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis. Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).
- McFall-Ngai, M. J. Unseen forces: the influence of bacteria on animal development. Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).
- McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism. Science. 254, 1491-1494 (1991).
- Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes. Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis. Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).
- Nyholm, S. V., Stabb, E. V., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Establishment of an animal-bacterial association: recruiting symbiotic Vibrios from the environment. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 10231-10235 (2000).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. Sampling the light-organ microenvironment of Euprymna scolopes: description of a population of host cells in association with the bacterial symbiont Vibrio fischeri. Biol Bull. 195, 89-97 (1998).
- Visick, K. L., Ruby, E. G. Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango. Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).
