प्रदर्शन और प्रसंस्करण Amyloid के लिए पूर्वकाल फैट पैड के FNA

Summary

फैट पैड आकांक्षा एक पसंदीदा, कम आक्रामक और कम लागत के रूप में अन्य विधियों की तुलना में प्रणालीगत amyloidosis के निदान के लिए amyloid का पता लगाने के दृष्टिकोण है. यह वीडियो लेख इष्टतम नैदानिक ​​परिणाम के लिए नमूने के उचित प्रसंस्करण के साथ वसा पैड आकांक्षा प्रदर्शन के लिए प्रक्रियात्मक रूपरेखा को दर्शाता है.

Abstract

ऐतिहासिक, दिल, जिगर और गुर्दे की बायोप्सी amyloidosis में amyloid जमा प्रदर्शित करने के लिए प्रदर्शन किया गया. चूंकि इस रोग के नैदानिक ​​प्रस्तुति तो चर और गैर विशिष्ट है, इन बायोप्सी के जुड़े जोखिम भी निदान उपज के लिए महान हैं. अन्य साइटों है कि त्वचा या मसूड़ों जैसे एक कम बायोप्सी जोखिम, है, भी कर रहे हैं अपेक्षाकृत इनवेसिव और महंगी है. इसके अलावा, इन बायोप्सी हमेशा पर्याप्त amyloid जमा नहीं है के लिए एक निदान की स्थापना कर सकते हैं. फैट पैड आकांक्षा कम लागत और न्यूनतम रुग्णता के साथ अच्छा नैदानिक ​​सहसंबंध का प्रदर्शन किया है. हालांकि, वहाँ इस प्रक्रिया के प्रदर्शन या aspirated नमूना है, जो चर और nonreproducible परिणाम की ओर जाता है प्रसंस्करण के लिए कोई मानकीकृत प्रोटोकॉल रहे हैं. ऊतकों में amyloid का पता लगाने के लिए सबसे अधिक बार उपयोग साधन कांगो लाल दाग एक polarizing खुर्दबीन का उपयोग वर्गों पर एक सेब हरे birefringence है. इस तकनीक को सेल से aspirated सामग्री के ब्लॉक तैयारी की आवश्यकता है. दुर्भाग्य से, amyloidosis के प्रारंभिक चरण में पेश रोगियों amyloid जो बहुत कांगो लाल दाग वसा पैड रेस्पायरेट्रस के सेल ब्लॉक वर्गों की संवेदनशीलता को कम कर देता है की न्यूनतम मात्रा है. इसलिए, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा वसा पैड रेस्पायरेट्रस ultrastructural मूल्यांकन का उपयोग किया जा चाहिए amyloid पता लगाने के लिए वृद्धि की संवेदनशीलता को देखते हुए. इस लेख सेल ब्लॉक वर्गों के दोनों कांगो लाल धुंधला हो जाना और ultrastructural पहचान के लिए इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी उपयोग amyloid का पता लगाने के के लिए पूर्वकाल वसा पैड आकांक्षा प्रदर्शन के लिए एक सरल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रक्रिया को दर्शाता है.

Protocol

परिचय प्रणालीगत amyloidosis एक उच्च चर रोग है कि विभिन्न प्रोटीन है कि सामूहिक amyloid रूप में संदर्भित कर रहे हैं की कोशिकी बयान को संदर्भित करता है है. बीटा pleated विन्यास के साथ इन amyloid तंतु के बयान शामिल अंगों के आधार पर विभिन्न नैदानिक ​​प्रस्तुतियों के लिए होता है. प्रणालीगत amyloidosis के सबसे नैदानिक ​​प्रासंगिक अभिव्यक्तियों में नोट कर रहे हैं जब दिल, जिगर, और / या गुर्दे जैसे महत्वपूर्ण अंगों की भागीदारी है. ऐतिहासिक, इन शामिल अंगों को amyloid की उपस्थिति का प्रदर्शन biopsied होगा. ये मामूली आक्रामक प्रक्रियाओं नकसीर सहित एक महत्वपूर्ण जोखिम ले. फैट पैड आकांक्षा के बाद से प्रणालीगत amyloidosis 1 में amyloid का पता लगाने के लिए एक विश्वसनीय और noninvasive विधि प्रदान दिखाया गया है. इस प्रक्रिया को अनिवार्य रूप से छोटे रक्त वाहिका 2 दीवारों में अल्प amyloid जमा मूल्यांकन के लिए fibroadipose ऊतक पुनः प्राप्त करने के लिए स्थानीय संज्ञाहरण के तहत पूर्वकाल पेट की दीवार में वसा के liposuction के लिए तुलनीय है. ऊतकों में amyloid पहचान के लिए सबसे अधिक बार उपयोग विधि विशेषता सेब हरे birefringence पैटर्न देखा है जब कांगो लाल दाग वर्गों एक polarized प्रकाश 3 खुर्दबीन के नीचे कल्पना कर रहे हैं रहता है. जब वसा पैड आकांक्षा किया जाता है, कांगो लाल दाग या तो सीधे लिप्त स्लाइड्स या aspirated वसा ऊतकों के सेल ब्लॉक तैयारी पर किया जा सकता है. हालांकि, amyloidosis के प्रारंभिक चरणों में रोगियों अल्प amyloid जमा है, जो बहुत कांगो लाल दाग सेल ब्लॉक 4,5 वर्गों की संवेदनशीलता को कम कर देता है. इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा वसा पैड रेस्पायरेट्रस के Ultrastructural मूल्यांकन बेहतर reproducibility और बेहतर 4 संवेदनशीलता है. इसलिए, यह एक सेल ब्लॉक के दोनों तैयार करने के लिए और प्रदर्शन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी 2 के लिए सभी वसा पैड रेस्पायरेट्रस प्रस्तुत करने की सिफारिश की है. फैट पैड आकांक्षा एक अपेक्षाकृत कम लागत और ऊतक प्राप्त करने के लिए प्रणालीगत amyloidosis निदान के लिए noninvasive विधि है. यह आलेख नमूना प्रसंस्करण के बारे में जानकारी के साथ साथ वसा पैड आकांक्षा प्रक्रिया का वर्णन करने के लिए दोनों कांगो लाल धुंधला हो जाना और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा ultrastructural मूल्यांकन के लिए नमूना प्रस्तुत है. इस वीडियो में, हम यह प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और सरल प्रक्रिया का प्रदर्शन करने के लिए इष्टतम नैदानिक ​​सामग्री निकालते हैं. 1. पूर्वकाल फैट पैड के FNA प्रदर्शन स्थानीय क्षेत्र के ए Anesthetization (चित्रा 1 & 2) शराब swabs या त्वचा की सफाई एक विशेष संस्था द्वारा पसंद एजेंट का प्रयोग, पेट के निचले हिस्से के वृत्त का चतुर्थ भाग क्षेत्र midline के लिए पार्श्व पर और नाभि (चित्रा 1) के नीचे त्वचा को साफ. मार्क 2 x 2 इंच के बारे में एक तिर्यग्वर्ग आकार क्षेत्र के रूप में एक अंकन कलम के साथ चित्र 1 में दिखाया गया है. Aspirate 1% के लगभग 10 एमएल एक 18G सुई के साथ lidocaine. संलग्न एक 25g 1 आधा इंच सिरिंज के लिए सुई. जबकि सवार दबाने जब तक तरल तिरस्कृत है और कोई हवाई बुलबुले मौजूद हैं ईमानदार सिरिंज दोहन द्वारा किसी भी फंस हवा निकालें. विषमकोण पहले से ही चिह्नित क्षेत्र के रूप में चित्रा 2 में दिखाया गया है की सीमाओं के साथ anesthetize. एक बिंदु पर त्वचा के नीचे सिर्फ 25g सुई डालने से शुरू करें और ध्यान से सुई subcutaneously पुश करने के लिए बिंदु एक्स सिरिंज सवार पर वापस खींचो करने के लिए सुनिश्चित करें कि आप एक पोत के भीतर नहीं हैं. फिर धीरे धीरे सवार धक्का lidocaine के 2.5 एमएल (lidocaine ¼ 10 एमएल सिरिंज के बारे में) करने के लिए घुसपैठ जबकि सुई दे सुई त्वचा से बाहर (2a3 चित्रा) के एक बिंदु पर आते हैं बिना बात करने के लिए वापस ले लिया. सुई के साथ अभी भी त्वचा के नीचे बिंदु वाई (2A4 चित्रा) की ओर दिशा बदलने और सुई बिंदु वाई (2b1 चित्रा) subcutaneously धक्का. पहले के रूप में की पुष्टि, कि सुई एक बर्तन में नहीं है और लगभग 2.5 एमएल lidocaine के बग़ैर जबकि धीरे बिंदु के माध्यम से सुई को वापस लेने के लिए एक (चित्रा 2b4 माध्यम 2B3). समान अंक बी से बिंदु बी और वितरण lidocaine के चमड़े के नीचे से एक्स और बी वाई (चित्रा 2d4 के माध्यम से 2c1) शुरू चरणों को दोहराएँ. चुभन से खून बह रहा रोकें और बाँझ गेज टुकड़ा की फर्म आवेदन द्वारा बी. अब आप जाँच करें कि क्षेत्र हल्के anesthetized विषमकोण भीतर आसन्न unanesthetized त्वचा के साथ तुलना करके टिप / कपास धुंध टुकड़ा के कोने से त्वचा को छू द्वारा anesthetized है हो सकता है. बी वसा पैड आकांक्षा (चित्रा 3) प्रदर्शन (वसा पैड आकांक्षा के प्रदर्शन से पहले आवेदन स्थानीय संज्ञाहरण के नजरअंदाज हो सकता है, क्षेत्रीय और व्यक्तिगत वरीयताओं के आधार पर हो सकता है पूर्वकाल वसा पैड आकांक्षा के लिए ठीक से प्रदर्शन FNAB प्रक्रिया एक चुभन में पूरा किया जा सकता है है. लेकिन व्यक्तिगत रोगी की दर्द दहलीज पर निर्भर करता है, 18G सुई की उपचर्म वसा ऊतकों में maneuvering के आगे और पीछे अपेक्षाकृत distres हैगाते हैं. anesthetization विधि का वर्णन यहाँ केवल 25g सुई के साथ दो चुभन में प्रभाव प्राप्त होता है और प्रक्रिया में सुधार सहिष्णुता के साथ दर्द averts.) 10 एमएल सिरिंज पर 18G 1 आधा इंच सुई इकट्ठे. उचित आवेदन और वैक्यूम की रिहाई के लिए सिरिंज पकड़ ("FNAB पकड़ / बंदूक") में सिरिंज सुई विधानसभा माउंट. शुद्ध और anesthetized विषमकोण क्षेत्र (चित्र 3a) के भीतर वसा में सुई की नोक डालें. पूरी तरह से उपचर्म ऊतक में सम्मिलित करने के लिए वैक्यूम (चित्रा 3b) उत्पन्न सुई के साथ सिरिंज सवार वापस लेना. वैक्यूम बनाए रखें और सुई उपचर्म वसा (चित्रा -3 सी के माध्यम से 3i) में विभिन्न दिशाओं में पीछे और आगे पैंतरेबाज़ी. प्रत्येक स्ट्रोक के रूप में संभव के रूप में लंबे समय दे सुई त्वचा के बाहर आ बिना चयनित सुई की लंबाई के साथ किया जाना चाहिए. अधिकतम नमूने प्रत्येक स्ट्रोक (3i चित्रा) के साथ दिशा बदलने के द्वारा हासिल की है. यह serosa के लिए स्पर्शरेखा है और त्वचा की सतह के समानांतर peritoneal गुहा के puncturing से बचने सुई की दिशा रखना महत्वपूर्ण है. fibroadipose ऊतक सिरिंज में जम जाता है. एक बार पर्याप्त fibroadipose ऊतक टुकड़े (टुकड़े युक्त रक्त मिश्रित नमूना के लिए 1 एमएल) प्राप्त की, निर्वात पूरी तरह से जारी है और सुई (चित्रा 3k) निकालने. रोगी है या सहायक प्रक्रिया के क्षेत्र पर धुंध के एक पैड के लिए खून की extravasation को रोकने के साथ फर्म दबाव लागू. 2. नमूना प्रसंस्करण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (4B चित्रा) के लिए glutaraldehyde समाधान में fibroadipose ऊतक के कम से कम 5-6 टुकड़े रखें. संस्थागत प्रोटोकॉल पर निर्भर करता है, fibroadipose ऊतक के टुकड़े के कुछ स्मीयरों उन्हें दो स्लाइड्स (चित्रा -4 ए) के बीच फैल द्वारा तैयार किया जा सकता है. शेष सामग्री सिरिंज में थक्का (यह 5-7 मिनट ले, थक्के समय के आधार पर हो सकता है) (चित्रा 4C) करने की अनुमति दी है. 10 formalin% सिरिंज ताकि पका हुआ fibroadipose ऊतक सामग्री सिरिंज और मुक्त फ्लोटिंग (4C2 चित्रा) की दीवार से उखाड़ फेंकना है Aspirate. सिरिंज (चित्रा 4C3) से सवार निकालें और नोजल अंत (चित्रा 4C4) के विपरीत सिरिंज के खुले अंत से 10% formalin कंटेनर में पका हुआ fibroadipose ऊतक हस्तांतरण. कंटेनर उचित लेबल और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए glutaraldehyde और एच एंड ई अनुभाग और कांगो माइक्रोस्कोपी ध्रुवीकरण के तहत मूल्यांकन के लिए दाग लाल के लिए formalin submit. यदि स्मीयरों तैयार हैं, वे व्यक्तिगत प्रयोगशाला के प्रोटोकॉल के अनुसार संसाधित किया जा सकता है. चित्रा 1. पूर्वकाल वसा पैड के FNAB लिए anesthetized क्षेत्र. चित्रा 2. स्थानीय क्षेत्र के Anesthetization. चित्रा 3. पूर्वकाल वसा पैड के FNAB प्रदर्शन. चित्रा 4. पूर्वकाल वसा पैड के प्रसंस्करण amyloid जमा का पता लगाने के लिए प्रयोगशाला में प्रस्तुत किया जा aspirate. 3. प्रतिनिधि परिणाम चित्रा 5. Fibroadipose ऊतक टुकड़े में छोटे रक्त वाहिकाओं की दीवार में amyloid Fibroadipose ऊतक formalin संसाधित, आयल, एम्बेडेड था कांगो लाल के साथ दाग, और प्रकाश माइक्रोस्कोपी ध्रुवीकरण द्वारा जांच की. छोटे से रक्त वाहिकाओं की दीवार में amyloid सेब हरे birefringence (सफेद तीर) दिखाता है. चित्रा 6. ऊतक amyloidosis सेब हरे birefringence कमी. Amyloidosis बिना अनुपस्थित है एक अलग मरीज ​​के ऊतकों में. ब्लू कोलेजन फाइबर की birefringence (सफेद तीर), आमतौर पर लगभग सभी नमूनों में मौजूद हैं. 7 चित्रा. रक्त वाहिका दीवार में amyloid के साथ संगत सीधे, गैर – शाखाओं में बंटी के इलेक्ट्रॉन माइक्रोग्राफ तंतुओं बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए 8-10 एनएम व्यास रक्त वाहिका दीवार में amyloid द्वारा गठित तंतुओं, .

Discussion

Amyloidosis का निदान आमतौर पर प्रभावित अंगों जैसे गुर्दे, जिगर, और / या दिल की एक ऊतक बायोप्सी के साथ हासिल की है. इस दृष्टिकोण उच्च नैदानिक ​​उपज है, तथापि, आक्रामक है और ^दो ​​नकसीर सहित जटिलताओं के साथ जुड़ा हो सकता है है . गुदा, मसूड़ों, और अस्थि मज्जा बायोप्सी निदान के लिए ^6,7,8 1960 के दशक में अपेक्षाकृत कम आक्रामक दृष्टिकोण के रूप में पसंद किया गया . पेट वसा पैड आकांक्षा 1973 में एक सुरक्षित, न्यूनतम इनवेसिव, प्रणालीगत ^एक amyloidosis के ऊतक निदान के लिए सरल है, और कम खर्चीला प्रक्रिया के रूप में रिपोर्ट किया गया था. हालांकि, प्रक्रिया और पुनर्प्राप्त नमूना के प्रसंस्करण के लिए दृष्टिकोण का ब्यौरा coherently सूचना नहीं है. यह वीडियो और लेख के कदम से कदम प्रक्रिया का वर्णन.

वसा पैड आकांक्षा में amyloid का पता लगाने के लिए दृष्टिकोण, इसी तरह, यह भी कुछ अध्ययनों की तुलना करने ^और विभिन्न दृष्टिकोणों 1,5,6,7,8 मूल्यांकन के साथ अच्छी तरह से मानकीकृत नहीं है. पूर्वकाल कांगो लाल धुंधला के साथ वसा पैड रेस्पायरेट्रस का मूल्यांकन कम अल्प amyloid ⁵ जमा के साथ amyloidosis के प्रारंभिक मामलों में विशेष रूप से कम interobserver reproducibility के साथ संवेदनशील है. Immunohistochemistry formalin तय आयल – एम्बेडेड सेल ब्लॉक अनुभागों पर प्रदर्शन किया और कांगो लाल कोशिका विज्ञान स्मीयरों पर प्रदर्शन प्रतिदीप्ति नैदानिक ^​​9,10 संवेदनशीलता में सुधार करने के लिए सूचित किया गया है. इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का पता लगाने और अल्प amyloid तंतु की पहचान fibroadipose ऊतकों में वसा पैड रेस्पायरेट्रस ^{4, 5} में छोटे रक्त वाहिनियों की दीवारों में सुधार. इस जानकारी के आधार पर, इस अनुच्छेद सेल ब्लॉक (कांगो लाल दाग नैदानिक ​​सेब हरे birefringence के लिए ध्रुवीकरण खुर्दबीन के नीचे सेल ब्लॉक वर्गों के मूल्यांकन के लिए और भी immunohistochemistry के रूप में संकेत दिया) और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए तैयार करने के लिए नमूना के प्रसंस्करण का वर्णन करता है. हालांकि, amyloid के लिए नमूना के मूल्यांकन के लिए चयनित दृष्टिकोण पर निर्भर करता है, यह कोशिका विज्ञान स्मियर तैयारी, सेल ब्लॉक तैयारी, और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए प्रसंस्करण के अधीन किया जा सकता है. कुछ प्रयोगशालाओं से aspirated fibroadipose ऊतक टुकड़े से तैयार है और कांगो लाल के साथ दाग ^{प्रतिदीप्ति} 10 अध्ययन स्मीयरों पर परीक्षण प्रदर्शन करते हैं .

आम तौर पर एक देर amyloidosis में, कांगो लाल ध्रुवीकरण माइक्रोस्कोपी के साथ प्रकाश माइक्रोस्कोपी के लिए पर्याप्त हो सकता है, लेकिन, सेल ब्लॉक खंडों पर माइक्रोस्कोपी ध्रुवीकरण के साथ रोग कांगो लाल धुंधला के प्रारंभिक चरणों में ^कम संवेदनशील और वसा पैड रेस्पायरेट्रस 4,5,11 के लिए विश्वसनीय है . Thioflavin टी सहित अन्य विशेष दाग इसी तरह की सीमाओं के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है. अन्य amyloid का पता लगाने के दृष्टिकोण कांगो लाल ध्रुवीकरण माइक्रोस्कोपी और प्रतिदीप्ति ¹⁰ के साथ amyloid के लिए aspirate स्मीयरों के मूल्यांकन शामिल हैं. हमारे अनुभव में इस विधि का कम प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है. इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा amyloid के लिए वसा पैड में रक्त वाहिकाओं का मूल्यांकन इन सीमाओं ^4,11 पर काबू. Amyloid के आगे लक्षण वर्णन immunoelectron ¹² माइक्रोस्कोपी द्वारा सूचित किया गया है, तथापि, इन तरीकों गैर तृतीयक देखभाल सेटिंग में व्यापक रूप से उपलब्ध नहीं हो सकता है.

सुई आकांक्षा प्रक्रियाओं के प्रदर्शन के लिए इस्तेमाल किया उनके गेज आकार ठीक में (21-25g), मध्यवर्ती (18 20G), और बड़े (जैसे – 14G) ¹¹ के अनुसार वर्गीकृत किया जा सकता है. पूर्वकाल वसा पैड आकांक्षाओं ^2,10 ठीक (21 करने के लिए 22G) मध्यवर्ती (18 के लिए 20G) से लेकर चर गेज का उपयोग करके प्रदर्शन किया जा सूचित किया गया है. बड़े पैमाने पर घावों के अधिकांश बेहतर गेज सुई (जैसे 25g के रूप में) के साथ से aspirated व्यापक गेज सुई (जैसे 18G) सेल ब्लॉकों के लिए अतिरिक्त नमूना प्राप्त करने के साथ अतिरिक्त गुजरता के साथ अच्छा कोशिका विज्ञान स्मीयरों प्राप्त है.

पूर्वकाल वसा पैड आकांक्षा के दौरान एकजुट fibroadipose ऊतक महीन सुई के साथ अच्छी तरह से नहीं aspirate करता है. सेल ब्लॉक तैयारी और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी fibroadipose वसा रेस्पायरेट्रस में ऊतक टुकड़े में छोटी रक्त वाहिनियों की दीवारों के मूल्यांकन के लिए महत्वपूर्ण हैं. व्यापक गेज सुई (जैसे 18G के रूप में) नैदानिक ​​पर्याप्त सामग्री ^2,10 उपज के लिए सिफारिश कर रहे हैं. के रूप में प्रक्रिया पारंपरिक FNAB करने के लिए तुलनीय है, वसा पैड आकांक्षा FNAB के रूप में जाना जाता है भले ही व्यापक गेज सुई ^यह 5 प्रदर्शन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

Materials

Alcohol swabs, gauze pads, marking pen, 10 mL syringes x2, 1% lidocaine (local anesthetic- If lidocaine is used alone, it causes an initial burning sensation after instillation. This can be prevented by using a 1:1 mixture of 1% lidocaine and 1% sodium-bi-carbonate), 18 gauge(G) 1 ½ inch needles x2 (for performing FNAB), 25G 1 ½ inch needle (for injecting local anesthetic), FNA syringe holder (“gun”), bandage, vial of glutaraldehyde (for electron microscopy), and biopsy container of 10% formalin.