이 프로토콜은 상피 세포와 세균의 동시와 언어 문화 microfluidic 공동 문화 모델을 설명합니다. 이 모델은 putative probiotic 박테리아 변종의 효과를 pathogenesis에 다른 수용성 분자 신호의 역할을 조사뿐만 아니라 화면을 사용할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
인간의 위장 (GI) 트랙트는 장의 상피 세포와 비 병원성 (공생) 박테리아가 공존하는 독특한 환경입니다. 이것은 병원체가 공생 레이어에 발생하는 microenvironment가 식민지의 범위를 결정하는 중요하다고 제안되었습니다. 병원체 식민 조사를 위해 현재 문화 방법은 잘 그들은 GI 요로 microenvironment를 모방하는 방식으로 박테리아와 상피 세포의 공동 문화를 활성화하지로 가설을 조사 적합하지 않습니다. 여기 우리는 진핵 세포 및 박테리아의 독립적인 문화를 수있는 microfluidic 공동 문화 모델을 설명하고, 병원체 식민지에 공생 microenvironment의 효과를 테스트. 공동 문화 모델은 공생을 개발하여 증명
프로토콜
1. 표준 SU - 8 석판술 1을 (이 동영상에 표시되지 않습니다)를 사용하여 실리콘 마스터의 제작.
- SU - 8 "마스터"(SU - 8 2050, MicroChem, 뉴턴, MA) 청정실에서 다른 구성 요소를 (서로 다른 두께의 PDMS의 점막, 공동 문화 챔버) fabricating하십시오.을 만들 표준 SU - 8 석판술 방법을 사용하여 이러한 마스터 금형은 모든 microfabrication 시설 (; 예를 들어, 스탠포드 Microfluidics 주조에서 가공 수 있습니다 http://thebigone.stanford.edu/foundry/ ).
- 이전 PDMS의 복제, 마스터에서 PDMS의 쉬운 버전을 촉진하기 위하여 진공 소스에 연결된 건조기에 플루오로 실란 수증기에 SU - 8 주인을 폭로. 종이 타월로 플루오로 실란의 드롭을 추가 한 분 진공을 적용합니다. 진공을 제거하고 플루오로 실란의 증착을위한 30 분 수 있습니다. 나중에 사용하기 위해 닫힌 용기에 SU - 8 마스터 보관하십시오.
2. 마스터이 SU - 8 ....
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토론
병원체 첨부 파일과 식민지에 대한 기존의 assays은 병원균이 추가되어있는 조직에 문화 접시에있는 진핵 세포의 monolayer를 활용. 이러한 모델들은 진핵 세포에서 개발한 공생 박테리아 biofilm을 포함하지 않는 생리학 관련되지 않습니다. 진핵 세포에 미리 재배 세균성 문화의 간단한 또한 biofilms가 높은 시간이 지남에 따라 발전 구조를 구성하는 본 형태로 이어질 가능성이 있으며, 실질적으로 불가능하지 않을 경우 그것은 박테리아의 존재의 문화 진핵 세포로, 매우 어렵습니다 생존에 상당한 손실없이 오랜 기간 동안. 병원균은 상피 세포에 부착 이러한 모델에서 공생 biofilm을 탐색하지 않기 때문에,이 모델은 정확하게 GI 트랙트의 상피 세포와 공생 박테리아의 조직을 모방하지 않습니다. 여기서 우리는 진핵 세포 및 박테리아의 공동 문화 pneumatically 제어 트래핑을 사용하는 microfluidic 장치의 개발을 설명합니다. 모델 병원체로 모델 진핵 세포 라인과 EHEC 같은 헬라 세포를 사용하여, 우리.......
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감사의 글
이 작품은 국립 과학 재단 (CBET 0,846,453)과 국립 보건원 (1R01GM089999)에 의해 부분적으로 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| SU-8 2050 | MicroChem Corp. | ||
| 고해상도 (16,256 dpi) 포토리소그래피 마스크 | Fineline-Imaging Inc, CO | ||
| Trichloro(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-tridecafluorooctyl)silane | Sigma-Aldrich | 77279 | |
| PDMS | Dow Corning | 184 SIL ELAST KIT 0.5KG | |
| DMEM | Thermo Fisher Scientific, Inc. | SH30002.02 | |
| 프로그래머블 스핀 코터 | Laurell Tech Corp | WS0650S | |
| 마스크 정렬기 | Neurotronix | Q4000 | |
| 산소 플라즈마 식각기 | March Plasma System, CA | CS-1701 | |
| 시린지 펌프 | Harvard Apparatus | ||
| Live/Dead 생존능/세포독성 키트 | Invitrogen | L-3224 |
참고문헌
- McDonald, J. C. Prototyping of microfluidic devices in poly(dimethylsiloxane) using solid-object printing. Anal Chem. 74, 1537-1545 (2002).
- Jeon, N. L. Design and fabrication of integrated passive valves....
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재인쇄 및 허가
