인간 제대 베인 내피 세포의 절연 (HUVEC)

요약

이 비디오 프로토콜은 인간의 탯줄에서 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)의 고립과 문화를 보여줍니다. 일단 이러한 세포도 휴스 연구소에 의해 입증 최적화된 섬유소 젤 비드 분석처럼 체외의 angiogenesis의 assays에서 사용할 수 있습니다 고립.

초록

Angiogenesis는 angiogenic 자극에 대한 응답으로, 새로운 선박은 기존 vasculature에서 만들어지는 복잡한 다단계 프로세스입니다. 이 단계는 다음과 같습니다 코드, 루멘 형성, 문합, 새로운 지하 막 형성에 세포외 기질, EC의 정렬에 내피 세포의 지하 막, 증식 및 마이 그 레이션 (돋아) (EC)의 저하. 시험 관내 assays의 많은이 과정을 연구하기 위해 개발하지만, 대부분의 전용 angiogenesis의 특정 단계를 모방하고, morphologically 혈관 종종 생체내에서 선박과 유사하지되었습니다. 여기서 우리는 인간 제대 정맥 EC와 섬유아 세포를 이용 체외의 angiogenesis 분석에 최적화된 보여줍니다. 중요한 것은이 모델 recapitulates angiogenesis의 핵심 초기의, 그리고 선박 편광 EC 둘러싸인 세포 특허 루멘을 표시합니다. 선박 쉽게 위상 대조 및 시간 경과 현미경으로 관찰하고, 다운 스트림 애플 리케이션을위한 순수한 형태로 복구할 수 있습니다.

프로토콜

절차

1. 초과 피를 닦아 패드와 지문에 대한 코드를 놓는다. 코드의 양쪽에 신선한 상처를 확인하십시오.
2. 정맥로, ON 플라스틱 바늘 피복과 함께 21 1 / 2 G 바늘을 삽입합니다. (정맥 최대 개방이며 2 작은 것들은 동맥 있습니다)
3. hemostat과 장소에 바늘을 고정하고 바늘로 행크스의 20cc 주사기를 첨부합니다.
4. 적당한 압력으로 정맥을 통해 행크스 밀어. 표백제와 함께 비커에 쓰레기를 수집합니다. (추진하는 것은 혈관 밖으로 터지는 바늘을 예방할하면서 한손으로 바늘과 코드를 개최.) 정맥에서 피를 많이있다면, 두 번째 시간을 씻으십시오.
5. 패드에 코드를 배치하고 정맥의 다른 쪽 끝을 클램프. 코드를 따라 누수를 확인하기 위해 행크스 몇 ML로 채웁니다. 5 ML를 철회하고 아래의 클램프를 분리합니다.
6. 20cc 주사기를 분리하십시오. 10cc 주사기의 플런저를 제거합니다. 10ml collagenase에 기름을 붓고 플런저를 교체, 바늘에 10cc 주사기를 첨부하십시오. 당신을 가장 먼저 금액은 오픈 엔드를 종료 나타날 때까지 정맥....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.1% Collagenase			탯줄당 10 mL, 37 °C로 가온
조직 배양 플라스크			T75, 탯줄당 1개
Hanks 배지
가위			멸균
비커			멸균
50 mL 튜브