쥐 MSCS는 대퇴골과 tibias으로부터 격리하고 자기 세포 분류에 의해 풍부하게되었다. 정렬 세포 유동세포계측법에 의해 표면 마커의 표현에 대해 확인했다. 이러한 세포는 하나의 식민지를 형성 clonal 밀도에 교양 있었다 그리고 이들 식민지는 복제 실린더로 구분했다.
Abstract
MSCS는 치료 어플 리케이션을위한 유망한 원천이다 성인 줄기 세포의 인구입니다. 이러한 세포는 골수에서 격리 수 있으며, 쉽게 플라스틱 준수로 인해 조혈 줄기 세포 (HSCs)에서 분리될 수있다. 이 프로토콜은 쥐 대퇴골과 tibias에서 MSCS를 분리하는 방법에 대해 설명합니다. 분리된 세포는 더욱 자기 셀 정렬하여 두 MSCS 표면 마커 CD54과 CD90에 대한 풍부한되었습니다. 표면 마커 CD54과 CD90의 표현은 다음 유동세포계측법 분석에 의해 확인되었다. HSC 마커 CD45도 정렬 MSCS가 HSCs의 소진되었습니다 있는지 확인하기 위해 포함되었습니다. MSCS 자연 매우 이질 있습니다. 다른 형태, 증식 및 분화 능력을 가지고 세포의 subpopulations가 있습니다. 이러한 subpopulations는 모든 알려진 MSCS의 마커를 표현하고 더 독특한 마커는 아직 다른 subpopulations에 대한 확인되지 않았습니다. 따라서, 다른 subpopulations을 분리하는 대체 방법은 단일 식민지 파생 세포를 분리하는 복제 실린더를 사용하고 있습니다. 단일 식민지에서 파생된 세포는 다음 교양하고 별도로 평가하실 수 있습니다.
Protocol
1. 쥐 MSCS의 분리 Mesenchymal 줄기 세포는 이전에 다음 ID로 한 설명된대로 6-8주 오래된 스프 라그 – 돌리 좋아하지, 2 고립되었다. 절연 MSCS 플라스틱 표면을 준수하고 쉽게 체외 문화 중에 확장할 수 있습니다. 동물은 마취 챔버에 넣고 약 5 분 동안 anaesthetized했다. 마취 동안, 점멸, 호흡 및 운동 활동의 속도를 관찰합니다. 그것이 모터의 활동을 중지하고…
Discussion
이 프로토콜은 격리와 MSCS를 풍요롭게하는 방법에 대해 설명합니다. 단일 식민지 파생 세포를 분리하는 방법도 포함될 수 있습니다. 성공적인 고립, 농축 및 식민지 분리에 중요한 몇 가지 단계가 있습니다. 쥐의 세포에서 분리하고 있지만, 그것은 셀 스트레이너 또는 혈전과 뼈 파편 제거와 비슷한 크기의 살균 나일론 메쉬를 통해 필터 권장합니다. 하룻밤 세포를 도금 후, 많은 죽은 세포는 매체…
Acknowledgements
작품은 보건 국립 연구소 (R01GM079688, R21RR024439 및 R21GM075838), 국립 과학 재단 (CBET 0,941,055) 및 MSU 재단 일부 지원되었다.
Zhang, L., Chan, C. Isolation and Enrichment of Rat Mesenchymal Stem Cells (MSCs) and Separation of Single-colony Derived MSCs. J. Vis. Exp. (37), e1852, doi:10.3791/1852 (2010).