إعداد Oligomeric β اميلويد 1-42 والتعريفي للعاهة اللدونة متشابك على شرائح الحصين
Summary
ميزة واحدة لمرض الزهايمر هو ارتفاع Aβ<sub> 1-42</sub> الببتيد. هنا نقدم مشروع بروتوكول لإعداد Aβ الاصطناعية<sub> 1-42</sub> oligomers ، الذي ينال الحصين بعيدة المدى ، وهي ربط الخلوي للذاكرة. هذا الإجراء مفيدا للتحقيق في آليات فحص الأمراض والمخدرات التي يسببها Aβ.
Abstract
ضعف الاتصالات متشابك من المحتمل أن تكمن وراء التغييرات الطفيفة التي تحدث في نساوي المراحل المبكرة من مرض الزهايمر ق (AD). ومن المعروف β اميلويد (Aβ) ، الببتيد التي تنتج في كميات عالية في ميلادي ، للحد بعيدة المدى (الكمونية) ، وهي الخلوية ربط التعلم والذاكرة. في الواقع ، بسبب ضعف LTP Aβ هو نموذج تجريبي لدراسة مفيدة متشابك اختلالات في النماذج ميلادي والفرز على المخدرات قادرة على التخفيف من العاهات أو العودة متشابك من هذا القبيل. وقد أظهرت الدراسات التي تنتج Aβ تعطل LTP تفضيلي عبر شكله oligomeric. هنا نقدم بروتوكول مفصلة للعرقلة من قبل LTP نضح الاصطناعية oligomerized Aβ1 – 42 على شرائح الببتيد الحصين الحادة. في هذا الفيديو ، ونحن المخطط إجراء خطوة بخطوة لإعداد Aβ oligomeric<sub> 1-42</sub>. ثم ، ونحن نتابع تجربة الفردية التي يتم تخفيض شرائح LTP في الحصين يتعرض لAβ oligomerized<sub> 1-42</sub> مقارنة مع شرائح في تجربة الرقابة حيث لا Aβ<sub> 1-42</subوكان> التعرض حدث.
Protocol
Discussion
على النحو الموصوف أعلاه ، قد تحدث مشاكل عدة في إعداد Aβ oligomeric النتيجة في LTP ايتأثر. طريقة واحدة لتقييم ما إذا كان تدهور Aβ أو عدم وجود oligomerization Aβ قد حدث هو تقييم إعداد Aβ باستخدام TRIS – Tricine PAGE / تحليل الغربية التنشيف والتحليلية تنبيذ فائق (وليس وصفها في هذا البروتوكول). عند?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة والمعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية (NINDS) (NS049442).>
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Aβ 1-42 (lyophilized) | American Peptide Co. | 62-0-80 | ||
| 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP) | Fluka | 52517 | ||
| Dimethylsulfoxide (DMSO) | Biotium | 90082 | ||
| 50mL Polypropylene Centrifuge Tubes | Corning | 05-538-67 | ||
| 1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery | Axygen | MCT-150-L-C | ||
| Phosphate-Buffered Saline pH 7.4 | Invitrogen-Gibco | 10010-023 | ||
| GASTIGHT Syringes 250 μL | Hamilton | 1725 | ||
| Bath sonicator | Branson | 3510 | ||
| Savant SpeedVac Concentrator System | Various distributors | SC 110A |
References
- Stine, W. B., Dahlgren, K. N., Krafft, G. A., LaDu, M. J. In vitro characterization of conditions for amyloid-beta peptide oligomerization and fibrillogenesis. J Biol Chem. 278, 11612-11622 (2003).
- Vitolo, O. V. Amyloid beta -peptide inhibition of the PKA/CREB pathway and long-term potentiation: reversibility by drugs that enhance cAMP signaling. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 13217-13221 (2002).
- Puzzo, D. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. J Neurosci. 28, 14537-14545 (2008).
- Lewczuk, P. Effect of sample collection tubes on cerebrospinal fluid concentrations of tau proteins and amyloid beta peptides. Clin Chem. 52, 332-334 (2006).
- Masliah, E. Mechanisms of synaptic dysfunction in Alzheimer’s disease. Histol Histopathol. 10, 509-519 (1995).
- Cullen, W. K., Suh, Y. H., Anwyl, R., Rowan, M. J. Block of LTP in rat hippocampus in vivo by beta-amyloid precursor protein fragments. Neuroreport. 8, 3213-3217 (1997).
- Itoh, A. Impairments of long-term potentiation in hippocampal slices of beta-amyloid-infused rats. Eur J Pharmacol. 382, 167-175 (1999).
- Walsh, D. M. Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo. Nature. 416, 535-539 (2002).
- Lambert, M. P. nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 6448-6453 (1998).
- Gong, B. Ubiquitin hydrolase Uch-L1 rescues beta-amyloid-induced decreases in synaptic function and contextual memory. Cell. 126, 775-788 (2006).
- Trinchese, F. Inhibition of calpains improves memory and synaptic transmission in a mouse model of Alzheimer disease. J Clin Invest. 118, 2796-2807 (2008).
