הכנת Oligomeric β עמילואיד 1-42 ו אינדוקציה של ירידת ערך הפלסטיות הסינפטית על Slices בהיפוקמפוס
Summary
תכונה אחת של מחלת אלצהיימר היא העלאת Aβ<sub> 1-42</sub> פפטיד. כאן אנו מספקים פרוטוקול להכנת Aβ סינתטי<sub> 1-42</sub> Oligomers, אשר פוגע בהיפוקמפוס potentiation לטווח ארוך, הסלולר לתאם של זיכרון. הליך זה שימושי לחקר מנגנוני סינון פתולוגיה התרופה Aβ-Induced.
Abstract
ירידת ערך של קשרים סינפטיים צפוי בבסיס השינויים בשכחה עדין המתרחשים בשלבים המוקדמים של מחלת אלצהיימר (AD). β עמילואיד (Aβ), פפטיד המיוצר בכמויות גבוהות לספירה, ידוע להפחית הגברה לטווח ארוך (LTP), הסלולר לתאם של למידה וזיכרון. אכן, פגיעה הנגרמת על ידי LTP Aβ היא פרדיגמה ניסויית שימושי לחקר תפקוד סינפטי במודלים לספירה עבור תרופות ההקרנה מסוגל מקלים או מביטול ליקויי הסינפטי כאלה. מחקרים הראו כי Aβ מייצרת את שיבוש LTP מועדף באמצעות טופס oligomeric שלה. כאן אנו מספקים פרוטוקול מפורט עבור LTP פגיעה על ידי טפטוף של oligomerized סינתטי Aβ1-42 פפטיד על פרוסות בהיפוקמפוס חריפה. בסרטון זה, אנו המתאר הליך צעד אחר צעד להכנת Aβ oligomeric<sub> 1-42</sub>. לאחר מכן, אנו עוקבים ניסוי יחיד בו LTP הוא מופחת פרוסות בהיפוקמפוס חשופים Aβ oligomerized<sub> 1-42</sub> לעומת פרוסות בניסוי לשלוט בהם לא Aβ<sub> 1-42</subחשיפה> קרה.
Protocol
Discussion
כפי שתואר לעיל, מספר בעיות בהכנת Aβ oligomeric עלול לגרום LTP נפגמה. אחת הדרכים להעריך אם Aβ השפלה או חוסר oligomerization Aβ ייתכן שאירעו היא להעריך את הכנת Aβ באמצעות טריס-PAGE Tricine / ניתוח סופג המערבי ultracentrifugation אנליטית (לא תיארו בפרוטוקול זה). כאשר דגימות סופג המערבי מוכנים בתנאים non-de…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי NIH המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ (NINDS) (NS049442).>
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Aβ 1-42 (lyophilized) | American Peptide Co. | 62-0-80 | ||
| 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP) | Fluka | 52517 | ||
| Dimethylsulfoxide (DMSO) | Biotium | 90082 | ||
| 50mL Polypropylene Centrifuge Tubes | Corning | 05-538-67 | ||
| 1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery | Axygen | MCT-150-L-C | ||
| Phosphate-Buffered Saline pH 7.4 | Invitrogen-Gibco | 10010-023 | ||
| GASTIGHT Syringes 250 μL | Hamilton | 1725 | ||
| Bath sonicator | Branson | 3510 | ||
| Savant SpeedVac Concentrator System | Various distributors | SC 110A |
References
- Stine, W. B., Dahlgren, K. N., Krafft, G. A., LaDu, M. J. In vitro characterization of conditions for amyloid-beta peptide oligomerization and fibrillogenesis. J Biol Chem. 278, 11612-11622 (2003).
- Vitolo, O. V. Amyloid beta -peptide inhibition of the PKA/CREB pathway and long-term potentiation: reversibility by drugs that enhance cAMP signaling. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 13217-13221 (2002).
- Puzzo, D. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. J Neurosci. 28, 14537-14545 (2008).
- Lewczuk, P. Effect of sample collection tubes on cerebrospinal fluid concentrations of tau proteins and amyloid beta peptides. Clin Chem. 52, 332-334 (2006).
- Masliah, E. Mechanisms of synaptic dysfunction in Alzheimer’s disease. Histol Histopathol. 10, 509-519 (1995).
- Cullen, W. K., Suh, Y. H., Anwyl, R., Rowan, M. J. Block of LTP in rat hippocampus in vivo by beta-amyloid precursor protein fragments. Neuroreport. 8, 3213-3217 (1997).
- Itoh, A. Impairments of long-term potentiation in hippocampal slices of beta-amyloid-infused rats. Eur J Pharmacol. 382, 167-175 (1999).
- Walsh, D. M. Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo. Nature. 416, 535-539 (2002).
- Lambert, M. P. nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 6448-6453 (1998).
- Gong, B. Ubiquitin hydrolase Uch-L1 rescues beta-amyloid-induced decreases in synaptic function and contextual memory. Cell. 126, 775-788 (2006).
- Trinchese, F. Inhibition of calpains improves memory and synaptic transmission in a mouse model of Alzheimer disease. J Clin Invest. 118, 2796-2807 (2008).
