Подготовка Олигомерные β-амилоида 1-42 И индукция Synaptic Обесценение Пластичность на срезах гиппокампа
Summary
Одной из особенностей болезни Альцгеймера является повышение Ар<sub> 1-42</sub> Пептида. Здесь мы предлагаем протокол для подготовки синтетических Ар<sub> 1-42</sub> Олигомеров, что снижает гиппокампа долговременной потенциации, сотовые коррелят памяти. Эта процедура полезна для исследования механизмов Ар-индуцированной скрининга патологии и наркотиков.
Abstract
Обесценение синаптических связей, скорее всего, лежат в основе тонких амнезии изменения, происходящие на ранних стадиях болезни Альцгеймера с (AD). β-амилоида (Ар), пептид, производимых в больших количествах в AD, как известно, уменьшает долговременной потенциации (LTP), сотовые коррелят обучения и памяти. В самом деле, LTP нарушения вызваны Ар является полезным экспериментальную парадигму для изучения синаптической дисфункции в нашей эры моделей и для скрининга препаратов способны смягчения или возврат таких синаптических нарушений. Исследования показали, что Ар производит LTP нарушения преимущественно через его олигомерные формы. Здесь мы предлагаем подробный протокол по нарушению LTP по перфузии олигомеризации синтетических Aβ1-42 пептида на острые срезах гиппокампа. В этом видео мы опишем шаг за шагом, порядок подготовки олигомерных Ар<sub> 1-42</sub>. Затем, мы следуем отдельного эксперимента, в котором LTP снижается в срезах гиппокампа подвергаются олигомеризации Ар<sub> 1-42</sub> По сравнению с ломтиками в контрольном эксперименте, где не Ар<sub> 1-42</sub> Экспозиции не было.
Protocol
Discussion
Как описано выше, ряд проблем в подготовке олигомерных Ар может привести к незатронутым LTP. Один из способов оценить, насколько Ар деградации или отсутствие Ар олигомеризации, возможно, произошли является оценка Ар подготовки использованием ТРИС-Tricine СТРАНИЦА / Западная блоттинг анали?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана NIH Национального института неврологических расстройств и инсульта (NINDS) (NS049442).>
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Aβ 1-42 (lyophilized) | American Peptide Co. | 62-0-80 | ||
| 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP) | Fluka | 52517 | ||
| Dimethylsulfoxide (DMSO) | Biotium | 90082 | ||
| 50mL Polypropylene Centrifuge Tubes | Corning | 05-538-67 | ||
| 1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery | Axygen | MCT-150-L-C | ||
| Phosphate-Buffered Saline pH 7.4 | Invitrogen-Gibco | 10010-023 | ||
| GASTIGHT Syringes 250 μL | Hamilton | 1725 | ||
| Bath sonicator | Branson | 3510 | ||
| Savant SpeedVac Concentrator System | Various distributors | SC 110A |
References
- Stine, W. B., Dahlgren, K. N., Krafft, G. A., LaDu, M. J. In vitro characterization of conditions for amyloid-beta peptide oligomerization and fibrillogenesis. J Biol Chem. 278, 11612-11622 (2003).
- Vitolo, O. V. Amyloid beta -peptide inhibition of the PKA/CREB pathway and long-term potentiation: reversibility by drugs that enhance cAMP signaling. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 13217-13221 (2002).
- Puzzo, D. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. J Neurosci. 28, 14537-14545 (2008).
- Lewczuk, P. Effect of sample collection tubes on cerebrospinal fluid concentrations of tau proteins and amyloid beta peptides. Clin Chem. 52, 332-334 (2006).
- Masliah, E. Mechanisms of synaptic dysfunction in Alzheimer’s disease. Histol Histopathol. 10, 509-519 (1995).
- Cullen, W. K., Suh, Y. H., Anwyl, R., Rowan, M. J. Block of LTP in rat hippocampus in vivo by beta-amyloid precursor protein fragments. Neuroreport. 8, 3213-3217 (1997).
- Itoh, A. Impairments of long-term potentiation in hippocampal slices of beta-amyloid-infused rats. Eur J Pharmacol. 382, 167-175 (1999).
- Walsh, D. M. Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo. Nature. 416, 535-539 (2002).
- Lambert, M. P. nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 6448-6453 (1998).
- Gong, B. Ubiquitin hydrolase Uch-L1 rescues beta-amyloid-induced decreases in synaptic function and contextual memory. Cell. 126, 775-788 (2006).
- Trinchese, F. Inhibition of calpains improves memory and synaptic transmission in a mouse model of Alzheimer disease. J Clin Invest. 118, 2796-2807 (2008).
