Organotypic kultur Adult Rabbit Retina
Summary
Denna artikel visar dissekering och inkubering av kanin näthinna och partikel-medierad genöverföring av plasmider kodning GFP eller en variation av subcellulära markörer i retinal ganglion celler.
Abstract
Organotypic kultur system av funktionella neuronala vävnader är viktiga verktyg i neurobiologisk forskning. Helst bör ett sådant system är förenligt med avbildningstekniker, genetisk manipulation, och elektrofysiologiska inspelning. Här presenterar vi ett enkelt interfas systemet vävnadsodling för vuxna kanin näthinna som inte kräver någon särskild utrustning och mycket lite underhåll. Vi visar de dissekering och inkubering av kanin näthinna och partikel-medierad genöverföring av plasmider kodning GFP eller en variation av subcellulära markörer i retinal ganglion celler. Kanin näthinnor odlade på detta sätt kan hållas vid liv i upp till 6 dagar med mycket små förändringar i den övergripande anatomiska struktur eller morfologi av enskilda ganglion-och amakrina celler.
Protocol
Discussion
1. Vad kan jag göra med den här metoden?
- Se cellmorfologin tydligt.
- Label celler för att spela in från dem.
- Överuttrycker proteiner, som PSD95, men även andra proteiner som modulera cellens svar, t.ex. jonkanaler, receptorer.
- Express hämmande RNA.
2. Hur länge kan jag hålla vuxen näthinnan?
- 4 dagar är inget problem för vuxna kaniner. Efter sex dagar i cellerna ser "sjuka", dvs axoner tillbaka, ser du svullnad av dendriter och registrering av lätta s…
References
- Landreth, . B. W., Agranoff, N. R., Smalheiser, S. M., Crain, M. B., Bornstein, R., Adler, P. J., Magistretti, A. G., Hyndman, W. J., Shoemaker, H., Rehm, T., Schafer, H., Betz, S. U., Kim, H., Takahashi, A. R., Caffe, A., Soderpalm, T., van Veen, H. C., Wong, S., Thompson, D. Y., Yu, S. J., Cringle, V. A., Alder, S. J., Taylor, G. M., Seigel, A. R., Caffe, P., Ahuja, B., Holmqvist, S., Azadi, J., Forsell, I., Holmqvist, J., Hatakeyama, R., Kageyama, S. S., Zhang, X. Y., Fu, C. J., Barnstable, S. W., Wang, X., Mu, W. J., Bowers, W. H., Klein, T., Inoue, M., Hojo, Y., Bessho, Y., Tano, J., Lee, R., Kageyama, A., Kretz, S. H., Hermening , S., Isenmann , I., Liljekvist-Larsson, K., Johansson, B., Reidel, W., Orisme, T., Goldmann, W. C., Smith, U., Wolfrum, H., Xin, J. A., Yannazzo, R. S., Duncan, E. V., Gregg, M., Singh, P., Koulen, S. A., Johnston, D. C., Tang, D. C., Lo, A. K., McAllister, K. a. t. z., LC, L. E., Rajagopalan, J. S., Malter, A. K., McAllister, W. -. B., Gan, J., Grutzendler, W., Wong, R., Wong, J., Lichtman, H., Sato, S., Hattori, S., Kawamoto, I., Kudoh, A., Hayashi, I., Yamamoto, G., Zhang, M. E., Selzer, R. L., Sohn, M. T., Murray, K., Schwarz, J., Nyitray, P., Purray, A. P., Franko, J. A., O’Brien, M., Holt, G., Whiteside, S. C., Lummis, M. H., Hastings, L., Klimaschewski, W., Nindl, M., Pimpl, P., Waltinger, K., Pfaller, P., Kettunen, J., Demas, C., Lohmann, N., Kasthuri, Y., Gong, R. O., Wong, N., Gamper, M. S., Shapiro, M. J., Wirth, P., Wahle, J., O’Brien, S. C., Lummis, A. M., Benediktsson, S. J., Schachtele, S. H., Green, M. E., Dailey, L., Chow, E. M., Levine, T. A., Reh, R. L., Rockhill, F. J., Daly, M. A., MacNeil, S. P., Brown, R. H., Masland, W., Sun, N., Li, S., He, W., Sun, N., Li, S., He, R. C., Stacy, R. O., Wong, E., Strettoi, V., Pignatelli, C., Rossi, V., Porciatti, B., Falsini, V., Pignatelli, E., Strettoi, V. P., Connaughton, D., Graham, R., Nelson, P. H., Edqvist, F., Hallbook, T. C., Jakobs, R. T., Libby, Y., Ben, S. W., John, R. H., Masland, Y., Qin, G., Xu, W., Wang, R., Roizenblatt, J. D., Weiland, S., Carcieri, G., Qiu, M., Behrend, M. S., Humayun, A., Koizumi, G., Zeck, Y., Ben, R. H., Masland, T. C., Jakobs, Explant culture of adult goldfish retina: a model for the study of CNS regeneration. Brain Res. 161, 39-55 (1979).
