زرع GFP - معربا عن Blastomeres للتصوير لايف التنمية الشبكية والدماغ في الجنين اسماك الزرد همي
Summary
ندلل على بروتوكول لتوليد اجنة الزرد خيالية للسلوك التصوير العيش الخلوية خلال مرحلة التطور الجنيني.
Abstract
تغيير الخلايا على نطاق واسع في مواقع وممتلكاتهم خلال مرحلة التطور الجنيني. وتنظم هذه التغييرات من التفاعلات بين الخلايا وبيئتها. أجنة خيالية ، والتي تتكون من خلايا جينية مختلفة عن الخلفية ، هي أدوات عظيمة لدراسة التفاعلات خلية خلية بوساطة الجينات في المصالح. شفافية الجنينية من الزرد في مراحل النمو المبكر تصاريح التصوير المباشر للالتشكل الأنسجة والأعضاء على المستوى الخلوي. هنا ، علينا أن نظهر بروتوكول لتوليد خيالية شبكية العين والدماغ في الأجنة الزرد والتصوير لأداء حية من خلايا المانحة. البروتوكول يشمل إعداد الإبر زرع ، وزرع GFP – معربا عن blastomeres المانحة لGFP سلبية المضيفين ، ودراسة سلوك الخلية المانحة تحت المجهر مبائر حية. مع تعديلات طفيفة ، ويمكن أيضا أن تستخدم هذا البروتوكول لدراسة التطور الجنيني من الأنسجة والأجهزة الأخرى في الزرد. وتناقش أيضا مزايا استخدام GFP إلى الخلايا المانحة التسمية.
Protocol
Discussion
في هذا الفيديو ، ونحن يبرهن على وجود طريقة لزرع قسيم أرومي لتحليل وضع شبكية العين والدماغ في الزرد. ويمكن أيضا أن تستخدم هذا البروتوكول لتحليل تطور الأنسجة والأجهزة الأخرى عن طريق الإفراج عن ببساطة blastomeres المانحة إلى مواقع المناظرة في الأجنة المضيفة. وسم مع جزيئات GFP …
Acknowledgements
وأيد هذه الدراسة من قبل المعاهد الوطنية للصحة (NIH) كور غرانت (5P30EY008098) والصناديق التالية لXW : المعاهد الوطنية للصحة والبحوث R01EY016099 المنحة لمنع العمى جائزة التطوير المهني. نشكر اثروب كيرا للحصول على مساعدة في مجال التصوير مبائر.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 5 ¾” Glass pipette | Fisher Scientific | 13-678-30 | ||
| Borosilicate Glass Capillary | WPI (World Precision Instruments, Inc.) | 1B100F-4 | ||
| FluoroDish | WPI | FD35 | ||
| Vertical Needle / pipette Puller | David Kopf Instruments | Model 720 | ||
| Micro Grinder | Marishige | EG-400 | ||
| Micro Forge | Marishige | MF-830 | ||
| Manual Microsyringe Pump | WPI | MMP | ||
| Forceps | Fine Science Tools | 11232-20 | ||
| Hydrofluoric Acid | Fisher Scientific | A147-1 | ||
| Penicillin- Streptomycin | GIBCO | 15140-122 | ||
| Agarose | RPI (Research Products International Corp.) | 9012-36-6 | ||
| Low melting agarose | Fisher Scientific | BP165-25 |
E3 egg water:
- 5 mM NaCl
- 0.17 mM KCl
- 0.33 mM CaCl2
- 0.33 mM MgSO4
- 0.1% methylene blue
References
- Zou, J., Lathrop, K., Sun, M., Wei, X. Intact RPE maintained by Nok is essential for retinal epithelial polarity and cellular patterning in zebrafish. Journal of Neuroscience. 28 (50), 13684-13695 (2008).
- Westerfield, M. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). THE ZEBRAFISH BOOK. , (2007).
- Ho, R. K., Kane, D. A. Cell-autonomous action of zebrafish spt-1 mutation in specific mesodermal precursors. Nature. 348, 728-730 (1990).
- Catalano, A., Raymond, P., Goldman, D., Wei, X. Zebrafish dou yan Mutation Causes Patterning Defects and Extensive Cell Death in the Retina. Developmental Dynamics. 236 (5), 1295-1236 (2007).
