Dun snijden van Slice voorbereidingen voor immunohistochemie
Summary
De huidige methode maakt het mogelijk reproduceerbaar cryostaat opdeling van de kleine, moeilijk te beheren, weefsel stukken, zoals biopsieën en hersenen plakjes. Wij gebruiken een eenvoudige aluminium bevriezing stadium bij het verwerken van weefsel en een standaard cryostaat om routinematig produceren 5-10 micron seriële secties van 400 micron dikke sneden hersenen te vergemakkelijken.
Abstract
Veel onderzoek in de neurowetenschappen, evenals andere disciplines, te betrekken het bestuderen van kleine, maar macroscopische stukken of delen van weefsel die bewaard zijn gebleven, vers verwijderd of weggesneden maar bleef levensvatbaar, zoals in het stukje voorbereiding van het hersenweefsel. Latere microscopisch onderzoek van dit materiaal kan lastig zijn, omdat het weefsel monsters kunnen worden moeilijk te hanteren. Aangetoond hier is een methode voor het verkrijgen van dunne cryostaatcoupes van weefsel met een dikte die kan variëren +0,2 tot +5,0 mm. We routinematig geknipt 400 micron dikke Vibratome hersencoupes serieel in 50-10 micron coronale cryostaat secties. De schijfjes worden doorgaans het eerst gebruikt voor elektrofysiologie experimenten en vervolgens vereisen microscopische analyse van de cytoarchitecture van de regio waar de opnames werden waargenomen. We hebben geconstrueerd een eenvoudig apparaat dat gecontroleerde en reproduceerbare voorbereiding en positionering van het weefsel slice toelaat. Dit apparaat bestaat uit een cilinder 5 cm lang met een diameter van 1,2 cm, die dienst doet als een beslissing tot bevriezing podium voor de slice. Een ring schuift precies over de cilinder het verstrekken van muren rond de slice waardoor het weefsel te worden ondergedompeld in de vrieskou verbinding (bijv. LGO). Dit is dan snel bevroren met gemalen droog ijs en de daaruit voortvloeiende wafer kan eenvoudig worden positie voor cryostaat snijden. Dunne secties kunnen ontdooien gemonteerd op gecoate dia's te laten verdere studies moeten worden uitgevoerd, zoals diverse kleuringsmethoden, in situ hybridisatie, of immunohistochemie, zoals hier aangetoond.
Protocol
Discussion
Het protocol hier gepresenteerde biedt onderzoekers met een beknopte, gemakkelijk te volgen schetsen van hoe dun cryostaatcoupes van de kleine, moeilijk te beheren, weefsel stukken, zoals biopsieën en de hersenen plakjes voor verdere studies moeten worden uitgevoerd, zoals het verkrijgen van verschillende kleuringsmethoden, in situ hybridisatie, of immunohistochemie.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| O. C. T. | Ted Pella, Inc | 27050 | ||
| Glycerol Solution | 30% Glycerol Solution in PBS w/v | |||
| Sucrose Solution | 30% Sucrose Solution in PBS w/v |
References
- Scoutern, C. W., O’Connor, R., Cunningham, M. Perfusion fixation of research animals. Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).
- Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat. Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).
