Floral-pendage de la transformation Arabidopsis thaliana Pour examiner PTSO2:: β-glucuronidase Expression du gène rapporteur
Summary
Cet article illustre l'floral dip méthode de<em> Agrobacterium tumefaciens</em> Transformation médiée par des<em> Arabidopsis thaliana</em>. En introduisant un cycle cellulaire régulé promoteur-rapporteur,<em> PTSO2:: β-glucuronidase (GUS)</em>, Dans<em> Arabidopsis</em>, Nous montre comment on détecte l'expression rapporteur GUS dans des plants transgéniques.
Abstract
La capacité à introduire des gènes étrangers dans un organisme est le fondement de la biologie moderne et de la biotechnologie. Dans le modèle de plante à fleurs<em> Arabidopsis thaliana</em>, Le floral dip méthode de transformation<sup> 1-2</sup> A remplacé toutes les méthodes précédentes en raison de sa simplicité, l'efficacité et à faible coût. Plus précisément, les pousses de floraison de jeunes<em> Arabidopsis</emPlantes> sont trempées dans une solution de<em> Agrobacterium tumefaciens</em> Transportant spécifiques constructions plasmidiques. Après le trempage, les plantes sont retournées à la croissance normale et les graines de rendement, un petit pourcentage de ce qui sont transformées avec le gène étranger et peut être sélectionné pour le milieu contenant des antibiotiques. Cette méthode floraux-pendage grandement facilité<em> Arabidopsis</em> Recherche et a grandement contribué à notre compréhension de la fonction des gènes des plantes. Dans cette étude, nous utilisons le floral dip méthode pour transformer un gène rapporteur,<em> Β-glucuronidase (GUS)</em>, Sous le contrôle de<em> TSO2</em> Promoteur.<em> TSO2</em>, Codant pour la ribonucléotide réductase (RNR) petite sous-unité<sup> 3</sup>, Est un gène du cycle cellulaire réglementé essentielle pour la biosynthèse PMDN dans la phase S du cycle cellulaire. L'examen des<em> GUS</em> Expression transgénique dans les<em> Arabidopsis</em> Semis montre que<em> TSO2</em> Est exprimé dans les tissus en division active. La méthode expérimentale et de matériaux rapportés peuvent être facilement adaptés non seulement pour la recherche mais aussi pour l'éducation à l'école secondaire et du collégial.
Protocol
Discussion
L'efficacité de transformation est déterminé par plusieurs facteurs différents, qui sont discutés ci-dessous:
- La santé des plantes et leur âge sont de première importance. Environ un mois vieilles usines produisant de nombreux bourgeons floraux immatures sont idéales. Découper les pousses primaires pour encourager la formation de pousses secondaires jours 3-4, avant la transformation va augmenter l'efficacité de transformation. Les plants plus âgés donnera lieu à des transformants, mai…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous remercions Chunxin Wang pour construire pTSO2:: GUS et pour des photos dans la figure 1, Detlef Weigel pour le partage du protocole de GUS-infaillible, Paja Sijacic, et Courtney Hollender pour leurs précieux commentaires. La recherche en laboratoire, Z. L s est soutenue par la National Science Foundation américaine (IOB0616096 et MCB0744752). ZL est partiellement pris en charge par l'Université du Maryland de la station expérimentale agricole.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 6-benzyladenine | Sigma | 852430 | ||
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Toxic, wear gloves | ||
| Murashige and Skoog Basal medium (MS) | Sigma | M5519 | ||
| Gamborg’s vitamin solution 1000X | Sigma | G1019 | ||
| X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt | Biosynth | B-7300 | Toxic, light sensitive keep in the dark | |
| Micropore 3M Tape | Fisher | 19027761 |
References
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).
- Wang, C., Liu, Z. Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development. Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).
